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细胞培养FAQ

1 冷冻管应如何解冻?取出冷冻管后, 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻, 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化, 并注意水面不可超过冷冻管盖沿, 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时, 必须注意安全, 预防冷冻管之爆裂。2 细胞冷冻管解冻培养时, 是否应马上去除DMSO?除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外, 绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞), 在解冻之后, 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中, 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分 ...

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分子诊断之脆折症

认识脆折症脆性X染色体综合征(Fragile X Syndrome),简称脆折症,是与人类的性染色体,即X染色体相关的遗传病。那么是什么原因造成染色体的异常呢?这不得不提到人类基因组计划。人类基因组计划项目于1990年正式启动,该项目预算高达30亿美元,集合了多个国家顶尖科学家,共同揭开了组成人体4万个基因的30亿个碱基对的秘密。该项目发现的第一个引起疾病的基因突变就是FMR1 (即脆性X智力低下1号基因)。从而发现脆折症 ...

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原位杂交技术和操作步骤详细介绍

原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行核酸特异性检测,与免疫组化技术的结合应用,能将DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。1969年Pardue和Gall将放射性标记的探针直接应用于纯化核酸的杂交,此后得益于分子克隆技术的发展,及不同探针标记系统和检测系统的应用,大大增加了原位杂交检测的应用灵活性和检测灵敏度。多种探针标记检测系统基于地高辛、生物素和荧光标记分子的 ...

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细胞株构建新技术——IOS(Integration Operating System)

在过去几年中,基因重组新技术不断给人们惊喜。上个世纪九十年代,Sangamo公司开发出Zinc Finger nuclease (ZFN)技术,用于遗传病的基因治疗技术的开发。在2010年将科研领域的应用授权给Sigma-Aldrich公司。 直到2012年,基因重组方面一直是ZFN技术一家独大。不过,自从全基因组测序的成本大幅降低后,包括德国和美国在内的学者对于ZFN的靶向性进行研究,发现其有比较严重的脱靶现象,这也给San ...

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细胞培养的成功因素——细胞消化篇

版上很多朋友讨论细胞培养问题,见到很多很好的经验总结,这里说一些我个人的经验,因为一些比较特殊的原因,我自己培养接触过近300种细胞,常用于做实验的,累积有百余种,可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的第一篇专题,并不是因为细胞消化最重要,而是近期看到大家频繁讨论这个话题,我就抛砖引玉,下面几点拙见,可能与其它朋友总结的一些经验有点出入,仅供大家参考。许多同学对细胞消化做了许多研究,得出了很 ...

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SCI医学论文写作讨论部份要诀

医学论文是科研成果的客观数据记录,为了便于学术交流,文章作者可将其投寄到SCI期刊发表,分享给全世界相同领域的科研工作者,可惜的是一大部分的稿件并未被录用,而这其中多数因为质量问题被退稿;还有一部份反复退修,延误了发表时间。  SCI论文的基本要求包括创新性、科学性、实用性、规范性、逻辑性和可读性等,以上几点网站上已经有很多文章介绍,此处不再累述。 论文各阶段内容还有着各不相同的具体要求,就original article 主体部 ...

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testo480在洁净室的应用

洁净室是指将一定空间范围内之空气中的微粒子、有害空气、细菌等之污染物排除,并将室内之温度、洁净度、室内压力、气流速度与气流分布、噪音振动及照明、静电控制在某一需求范围内,而所给予特别设计之房间。亦即是不论外在之空气条件如何变化,其室内均能俱有维持原先所设定要求之洁净度、温湿度及压力等性能之特性。洁净室送风、排风、新风之间应切换自如,如生产停止、排风柜也应停止或减小风量,新风也应调小。这些参数都需要测量风速才能精确地 ...

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贴壁细胞消化方法总结

一、酶消化法1、胰酶。这是用得最多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大,从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞,在37度条件下,一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液,否则影响活性。保存于-20度。2、胶原酶。这种方法比较少,一般是用原代培养时,从组织消化下细胞。这种方法作用温和,对细胞损伤较小,但是,价格也较贵。中 ...

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使用Curve Expert软件绘制ELISA标准曲线

在进行ELISA实验操作时,绘制标准曲线的方法有很多种,现在多采用Excel软件来进行,今天推荐一款标准曲线绘制软件Curve Expert。简单介绍下其使用方法:1.启动“Curve Expert1.3”(最新有1.4版本的,其实功能都差不多的,下载请看文章底部)2.X轴输入标准品的OD值,Y轴输入所对应的浓度值,如图:3.单击按钮,出现如下对话框4.单击按钮,出现如下两个对话框,关闭下面一个对话框5. 在对话框的右上角出现一些曲 ...

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比色皿选择与使用技巧

1、 比色皿的正确选择比色皿透光面是由能够透过所使用的波长范围的光的材料制成。在200-350 nm工作的比色皿适用于紫外区,必须使用石英或熔熔硅石制成透光面的石英比色皿。(注:熔熔硅石的俺还真没见过,只用过石英的,哪位板油要是有的话,一定要让俺看看,开开眼界啊)石英比色皿既可用于紫外区又可用于可见区,但是价格一般比较贵哦,所以要根据使用波长选择比色皿,如果不用紫外区的话,用普通玻璃比色皿就行了,一则浪费没必要,二则,嘿嘿, ...

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浅谈离心机

离心机的工作原理是:在超强的离心力作用下,使旋转中的样品逐渐偏离旋转中心,从而达到沉降分离的效果。虽然离心机的原理很简单,但是其适用于大量不同的工业应用和研究实验,离心相关的技术文献非常之多。实验室常规离心机值得注意的是,离心的分离效率与旋转半径成正比,而与转速(指每秒或每分钟的旋转速度,通常用每分钟旋转周数rpm表示)的平方成正比。因此,在转速固定不变的情况下,半径为12英寸的离心机的效率是半径为6英寸的2倍。 ...

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轻松进行细胞周期、细胞凋亡和 GFP 表达分析

Cellometer图像细胞功能分析仪,不仅仅可以进行细胞计数和细胞活力分析,还 可轻松、精确进行细胞周期,凋亡,GFP表达的分析CellometerK2双荧光细胞活力分析仪和CellometerVISIONCBA双荧光细胞功能分析系统 不仅仅可以快速、准确检测细胞浓度和细胞活力,而且进行多种细胞功能分析。如下图:细胞周期分析通过 FCSExpress流式软件,可轻松获得“类流式”分析数据不仅提供研究者流式结果,还提供可 ...

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人类惊跳反射的生理心理机制及其应用

惊跳反射(Startle reflex),又称震惊反射或惊反射,是动物被突发性的强感觉刺激诱发的一种防御性反射,表现为面部及躯体肌肉的快速收缩,之后往往还伴随着当下行为的中止以及心率的增加。这样的反应模式能由听觉、视觉、触觉等多种感觉模式所诱发,表现出了很大的可塑性和行为的多样性,具有一种应对掠食者伤害的防御性功能,在人类也是应对意外刺激或遇到险情时的一种避险保护反应。惊跳反射还是衡量各种认知、注意、感觉和感觉运动 ...

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PBMC 细胞的精确计数和活性分析

一、PBMC细胞计数的现状1. 目前,绝大多数的科研工作者仍在使用血球计数板 在显微镜下进行手工计数 PBMCs;2. 但是显微镜下由于白细胞和红细胞大小非常接近, 不能完全区分白细胞和红细胞;3. 通过红细胞的双凹形形态鉴别红细胞,需要经验丰 富的操作者,且不停地调焦来鉴别;可想而知要把每个 红细胞鉴别出来,要耗费多长的时间,需要多强的工作量。PBMC样本的差异性大 由于个体的差异(如正常人和病人)和人工分离提取的差异,红细胞和血小板污染的程度差 ...

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医学论文的基本结构和要求

1 文题文题应简短明了开门见山对读者具有吸引力,能准确地概括论文内容,点名主题,做到文题与内容相符。一般文题不超过20个字。写作中应注意:文题中无虚词如/关于0/对于0等;文题开头避免使用阿拉伯数字(如病例数)以利于编制索引;少用或不用副标题;尽可能避免使用标点符号;需要特殊说明时在文题右上角标注/0并在本页左下脚说明如:国家自然科学基金资助项目(No.9854367);非公知公用的名词术语要书写全称不能随便缩写如把甲 ...

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抗纤维化药物临床实验的新趋势:策略与方法

肝硬化是导致美国人死亡的主要原因之一,并且有快速蔓延之势。在世界范围内,肝硬化甚至具有不成比例的影响,正处于生命黄金期的年轻人或患有其他疾病但健康状况得到改善的病人更容受到该疾病的影响,这真令人惋惜。 为促进人类抗纤维化临床试验,以最终达成共识为目的,今年将举行AASLD新趋势主题会议,本次会议旨在商讨与解决“抗纤维化药物临床实验的新趋势:策略与方法“。本次大会举办地:美国芝加哥;举办时间:2014年6月21日-22日。 ...

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抗纤维化药物临床实验的新趋势:策略与方法

肝硬化是导致美国人死亡的主要原因之一,并且有快速蔓延之势。在世界范围内,肝硬化甚至具有不成比例的影响,正处于生命黄金期的年轻人或患有其他疾病但健康状况得到改善的病人更容受到该疾病的影响,这真令人惋惜。 为促进人类抗纤维化临床试验,以最终达成共识为目的,今年将举行AASLD新趋势主题会议,本次会议旨在商讨与解决“抗纤维化药物临床实验的新趋势:策略与方法“。本次大会举办地:美国芝加哥;举办时间:2014年6月21日-22日。 ...

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购买抗体及试剂盒的一些体会

近日为实验购买流式细胞术的抗体已经大鼠干扰素-γ的试剂盒,费了不少时间和精力,现将在购买过程中的一些体会总结一下,以供像我一样刚入实验室,难寻帮助的新手一些参考:1. 首先得明确要测的指标,以及测这些指标的方法,并去比较哪种方法在自己的实验条件下可行性好,最好又是最经济的。因为每个指标可能都有几种不同的方法,所以了解并去比较各种方法,可以让自己的实验方案更优化。这就要求去检索相关的文献,去了解这些方法。相应的原理基本 ...

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免疫疗法:强大自身墙堡 不再谈癌色变

免疫系统可以是一个对抗癌症的强大武器,但如何控制它仍是研究人员需要努力解决的问题。本篇介绍如何利用人体自身免疫系统进行癌症治疗。第一个肿瘤是一个小型黑色素瘤,长在马克戈尔曼(MarkGorman)脖子左侧上。医生将它切除了,并向戈尔曼保证,癌症已经治好了。但八年之后,在一次例行体检中,医生看着戈尔曼的腹部,皱起了眉头,问他是不是一个酒鬼。黑色素瘤已经扩散到戈尔曼的肝脏,缠绕在下腔静脉中,形成一个不能通过手术切除的 ...

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呼吸系统

呼吸系统包括鼻、咽、喉、气管、支气管和肺等器官。从气管至肺内的肺泡,是连续而反复分支的管道系统。吸呼系统可分为导气部和呼吸部。导气部从鼻腔开始直至肺内的终末细支气管,无气体交换功能,但具有保持气道畅通和净化吸入空气的重要作用。鼻还有嗅觉功能,鼻和喉等又与发音有关。呼吸部是从肺内的呼吸细支气管开始直至终端的肺泡,这部分管道都有肺泡,行使气体交换功能。此外,肺还参与机体多种物质的合成和代谢功能 。

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