互联网2013-11-13
带有地高辛标记的dUTP(图1)通过缺口翻译、随机翻译或PCR等反应而使探针核酸片段带有地高辛,进一步可与带有AP、CSP等各种抗地高辛抗体复合物发生免疫反应,使探针上带有AP等分钟,进一步能催化化学或发光反应。图2为各种DIG标记探针及检测类型汇总;图3为DIG标记探针的方法;图5为标记探针应用;图4为DIG标记探针的检测方法。 图1 图2 图3 图4 图5
1. 1ug(10ng <DNA探针量<3ug)待标记DNA溶于16ul水中,在沸水浴10分钟变性,迅速放于冰浴(NaCl或乙醇冰浴)冷却。
2. 在冰浴上,上述管中加入4ulDIG-HIGH-Prime混合物(含5×反应缓冲液、50%甘油、各1mM的dATP,dCTP,dGTP,0.65mM的dTTP及0.35mM的DIG-dUTP ,1U/ulKlenow酶)。
3. 离心混合,3760分钟或过夜
4. 加2ul0.2MEDTA(pH8.0)或65℃10min终止反应。
5. 在上述20/22ul反应体系中加入2.5ul4MliCl,75ul(-20℃预冷)乙醇沉淀,70%乙醇洗沉淀,真空干燥,复溶于少量PH8.0TE中,-20℃保存(忌讳反复冻融)。
相关产品推荐
PKH26染色| PKH26细胞染色| 外泌体染色| 细胞增殖示踪荧光探针| 外泌体荧光标记 | 外泌体示踪服务
询价
探针法定量PCR预混液(无ROX),阿拉丁
¥659.90
探针法定量PCR预混液(高ROX),阿拉丁
探针法定量PCR预混液(通用ROX),阿拉丁
¥741.90
Di-4-ANEPPDHQ膜电位荧光探针,阿拉丁
¥8640.90
相关问答
问
EMSA实验中纯化蛋白的量和已标记探针的比例是多少?
大佬们,southern blot 结合标记探针为什么还要染色
双标记探针QPCR问题
相关方法
地高辛标记探针的信号
2024-05-14
地高辛标记探针的信号放大
探针标记法
推荐阅读
地高辛标记cRNA探针
地高辛标记核酸探针的标记方法
地高辛标记寡核苷酸探针