细胞增殖的检验方法:BrdU标记法
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1、细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0.4%FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0 期。
2、终止细胞培养前,加入BrdU(终浓度为30μg/L),37℃,孵育40min。
3、弃培养液,玻片用PBS洗涤3次。
4、甲醇/醋酸固定10min。
5、经固定的玻片空气干燥,0.3%H2 O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6、5%正常兔血清封闭。
7、甲酰胺100℃,5min变性核酸。
8、冰浴冷却后PBS洗涤,加1抗即抗小鼠BrdU单抗(工作浓度1:50),阴性对照加PBS或血清。
9、按ABC法进行检测,苏木素或伊红衬染,在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数,计算标记指数(LI)。