细胞增殖的检验方法：BrdU标记法

BrdU 标记法

 

1． 细胞以 1.5 × 10⁵ /ml 细胞数接种于直径 35ml 培养皿中（内放置一盖玻片），培养 1 天，用含 0.4 ％ FCS 培养液同步化 3 天，使绝大多数细胞处于 G₀ 期。

2． 终止细胞培养前，加入 BrdU （终浓度为 30 μ g/L ）， 37 ℃，孵育 40min 。

3． 弃培养液，玻片用 PBS 洗涤 3 次。

4． 甲醇 / 醋酸固定 10min 。

5． 经固定的玻片空气干燥， 0.3 ％ H₂ O₂ - 甲醇 30min 灭活内源性氧化酶。

6． 5 ％正常兔血清封闭。

7． 甲酰胺 100 ℃， 5min 变性核酸。

8． 冰浴冷却后 PBS 洗涤，加 1 抗即抗小鼠 BrdU 单抗（工作浓度 1 ： 50 ），阴性对照加 PBS 或血清。

9． 按 ABC 法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数 10 个高倍视野中细胞总数及 BrdU 阳性细胞数，计算标记指数（ LI ）。