【共享】核酸吸光度、分子量、摩尔浓度之间的相互换算

光度计测量的转换:
双链DNA (ds DNA)：A260 = OD260 = 1 相当于50 µg/ml溶液
单链DNA(ss DNA)：A260 = OD260 = 1相当于33 µg/ml溶液
RNA：A260 = OD260 = 1相当于40 µg/ml溶液
参考文献：Freifelder, D., Physical Biochemistry: Applications to Biochemistry & Molecular Biology, W.H. Freeman and Company, CA, 1982, p. 494-536.
核酸分子量计算方程式：
吸光度(A)＝摩尔消光系数×浓度×长度
500 bp的双链DNA＝325,000 Daltons
500 nundefined的单链DNA＝162,500 Daltons      nt_~L_nucleotide~Kbr_~H~M~2~1dNMP的平均分子量＝325 Daltons
寡聚体定量：
20-mer，A260 = 1的贮存液含有5 nmol寡聚体：5 nmol = 33 µg/(20×325)
40-mer，A260 = 1的贮存液含有5 nmol寡聚体：2.5 nmol = 33 µg/(40×325)
pmol为单位的引物转换为µg为单位的引物：
（X pmoles×长度bp×325）/ 1,000,000
例：10pmoles的25-mer，则为
（10pmol×25bp×325）/ 1,000,000 = 0.081 µg primer
µg为单位的引物转换为pmol为单位的引物：
（X pmoles×1,000,000）/（长度bp ×325）
例：0.1µg的20-mer，则为
（0.1µg×1,000,000）/（20bp×325）= 15.4 pmoles primer
PCR扩增反应引物浓度的计算：
引物毫摩尔浓度（mM）= pmoles/µl
例1：100µl PCR反应体系中有20pmol的引物 = 0.20 mM
例2：引物为24bp，并溶解于0.1ml µl H2O中；
10µl溶液稀释至1.0ml测定其A260为：A260 = OD260 = 0.76；
则贮存液在260nm（A260）的吸光度为76；
0.1ml的贮存液含有7.6个单位的A260；
引物碱基组成为：A=6, C=6, G=6, T=6；
260nm引物的摩尔消光系数 = a(16,000) + b(12,000) + c(7,000) + d(9,600)
注：a、b、c、d分别是 A's、G's、C's、T's的碱基个数；
PCR引物的摩尔消光系数= 6(16,000) + 6(12,000) + 6(7,000) + 6(9,600) = 267,600
则PCR引物贮存液的摩尔浓度为：76/267,600 = 284 mM