流式细胞术分离法分离T淋巴细胞和B淋巴细胞

一、试剂及配制

1. RPMI-1640培养基：应选购不含酚红的，使用时加入5%的小牛血清。

2. FITC-抗CD3单克隆抗体：FITC为异硫氰酸荧光素，CD3为T细胞表面特有的蛋白质分子（分化抗原）。

二、操作方法

1. 用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离单个核细胞，用RPMI-1640培养基配成1×107 /ml；

2. 加适量FITC-抗CD3，4℃孵育30min，用RPMI-1640培养基洗2次；

3. 用流式细胞仪进行分析。在散射光参数图上选取淋巴细胞群，在荧光参数图上选取绿色荧光阳性的细胞进行分选。

三、注意事项

1. 分选细胞常常用于细胞亚群的进一步的功能研究，因此，整个过程均需要严格无菌操作，并且在进行流式细胞仪进行无菌冲洗。

2. 此法分离得到的T细胞纯度可达到99%，收获率可达到90%。

3. 由于喷嘴孔很小（约70～100μm），分选前用30～40μm孔径的滤网过滤细胞悬液，以免稀薄凝块堵塞喷嘴。