原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法
互联网
原理:
苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度,如果染料与含有脂类的试样接触,便有大量染料进入脂类物质的结构内,使这些结构呈红色。多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色,使脂质呈色。也可用四氧化锇染色,脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇而呈黑色。
配制试剂:
1.苏丹红Ⅲ染色液:将1g苏丹红Ⅲ溶于加温的70%乙醇溶液中过滤备用;
2.甲醛钙固定液:将10ml甲醛和1g CaCl2混合加水至100ml;
3.甘油明胶:将12g明胶加入120ml蒸馏水中水浴加热使其完全溶解,再加入60ml甘油和1g苯酚,充分混匀后即得。于4℃储存备用;
染色步骤:
1.用Hanks液漂洗盖玻片3次;
2.用甲醛钙固定液固定20min;
3.用蒸馏水漂洗盖玻片3次;
4.用70%乙醇将盖玻片冲洗3次;
5.用苏丹红Ⅲ染色液覆盖盖片样品,染色10—30min;
6.用70%乙醇漂洗盖片3次;
7.用甘油明胶封片后观察;
结果:
原代细胞含脂类的区域呈橘红色;