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原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法

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原理:

苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度,如果染料与含有脂类的试样接触,便有大量染料进入脂类物质的结构内,使这些结构呈红色。多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色,使脂质呈色。也可用四氧化锇染色,脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇而呈黑色。

配制试剂:

1. 苏丹红Ⅲ染色液:将1g苏丹红Ⅲ溶于加温的70%乙醇溶液中过滤备用;

2. 甲醛钙固定液:将10ml甲醛和1g CaCl2 混合加水至100ml;

3. 甘油明胶:将12g明胶加入120ml蒸馏水中水浴加热使其完全溶解,再加入60ml甘油和1g苯酚,充分混匀后即得。于4℃储存备用。

染色步骤:

1. 用Hanks液漂洗盖玻片3次;

2. 用甲醛钙固定液固定20min;

3. 用蒸馏水漂洗盖玻片3次;

4. 用70%乙醇将盖玻片冲洗3次;

5. 用苏丹红Ⅲ染色液覆盖盖片样品,染色10—30min;

6. 用70%乙醇漂洗盖片3次;

7. 用甘油明胶封片后观察。

结果:

原代细胞含脂类的区域呈橘红色。

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