荧光抗体的鉴定
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荧光抗体在使用前应加以鉴定。鉴定指标记包括效价及荧光素与蛋白质的结合比率。抗体效价可以用
琼脂
双扩散法进行滴定,效价大于1:16者较为理想。荧光素与蛋白质结合比率(f/p)的测定和计算的基本方法是:将制备的荧光
抗体
稀释至a
280
1≈1.0,分别测读a
280
(蛋白质特异吸收峰)和标记荧光素的特异吸收峰,按公式计算。
按公式计算。
f/p值越高,说明 抗体 分子上结合的荧光素越多,反之则越少。一般用于固定标本的荧光抗体以f/p=1.5为宜,用于活细胞染色的以f/p=2.4为宜。
抗体工作浓度的确定方法类似elisa间接法中酶标抗体的滴定。将荧光抗体自1:4~1:256倍比稀释,对切片标本作荧光抗体染色。以能清晰显示特异荧光、且非特异染色弱的最高稀释度为荧光抗体工作浓度。
荧光抗体的保存应注意防止抗体失活和防止荧光猝灭。最好小量分装,-20℃冻存,这样就可放置3~4年。在4℃中一般也可存放1~2年。
按公式计算。
f/p值越高,说明 抗体 分子上结合的荧光素越多,反之则越少。一般用于固定标本的荧光抗体以f/p=1.5为宜,用于活细胞染色的以f/p=2.4为宜。
抗体工作浓度的确定方法类似elisa间接法中酶标抗体的滴定。将荧光抗体自1:4~1:256倍比稀释,对切片标本作荧光抗体染色。以能清晰显示特异荧光、且非特异染色弱的最高稀释度为荧光抗体工作浓度。
荧光抗体的保存应注意防止抗体失活和防止荧光猝灭。最好小量分装,-20℃冻存,这样就可放置3~4年。在4℃中一般也可存放1~2年。