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鼠肝细胞原代培养实验方法

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一、 实验材料:

6-8周龄大小鼠;剪刀,镊子,灌流用针头,连接管,玻璃平皿,细胞筛,冰盒

二、实验方法:

1. 培养用液

洗涤培养基:DMEM

基础培养基:DMEM/F12

2. 消化用液

前灌流液T1 ;后灌流液T2

3. 培养基本操作方法

a. 将小/大鼠进行麻醉,待其进入深度麻醉状态后迅速将其固定于解剖板上,于超净台中解剖,暴露肝脏;

b. 沿肝门静脉插管固定,灌流前灌流液T1(37℃下预热),流速5ml/min,待肝脏膨胀后迅速剪断下腔静脉, 灌流15min;

c. 前灌流液灌流完后,立即灌流后灌流液T2(37℃下预热),流速3ml/min,5-10min;

d. 取下肝脏,置于平皿中,冰上剪碎肝组织,200目滤网过滤;用基础培养基清洗网上组织;

e. 收集滤液,600rpm 离心2min;重复一次;

f. 弃上清,往沉淀中加2ml完全培养基,重悬细胞后,台盼蓝染色计数,将细胞接种至鼠尾胶原包被的25cm2培养瓶中,37℃ 5%CO2培养箱中培


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