鼠肝细胞原代培养实验方法
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一、 实验材料:
6-8周龄大小鼠;剪刀,镊子,灌流用针头,连接管,玻璃平皿,细胞筛,冰盒
二、实验方法:
1. 培养用液
洗涤培养基:DMEM
基础培养基:DMEM/F12
2. 消化用液
前灌流液T1 ;后灌流液T2
3. 培养基本操作方法
a. 将小/大鼠进行麻醉,待其进入深度麻醉状态后迅速将其固定于解剖板上,于超净台中解剖,暴露肝脏;
b. 沿肝门静脉插管固定,灌流前灌流液T1(37℃下预热),流速5ml/min,待肝脏膨胀后迅速剪断下腔静脉, 灌流15min;
c. 前灌流液灌流完后,立即灌流后灌流液T2(37℃下预热),流速3ml/min,5-10min;
d. 取下肝脏,置于平皿中,冰上剪碎肝组织,200目滤网过滤;用基础培养基清洗网上组织;
e. 收集滤液,600rpm 离心2min;重复一次;
f. 弃上清,往沉淀中加2ml完全培养基,重悬细胞后,台盼蓝染色计数,将细胞接种至鼠尾胶原包被的25cm2培养瓶中,37℃ 5%CO2培养箱中培