PCR-SSO洗膜
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PCR-SSO 洗膜
【仪器和试剂 】
(1) 洗膜液I:2XSSPE,0.5%SDS。
(2) 洗膜液II: 0.1XSSPE,0.5%SDS。
(3) 恒温水浴摇床(80rpm,有盖,温度可调至65℃)
(4) 精确温度计(精度为±0.1℃)
(5) 放射检测仪
【操作步骤 】
(1) 杂交完成后,取出尼龙膜,并放入装有洗膜液I的容器中,室温洗涤5分钟;
(2) 将尼龙膜转入另一装有新鲜洗膜液I的容器中,继续室温洗涤15分钟;
(3) 将尼龙膜转入另一装有洗膜液II的容器中,37℃洗涤30分钟;
(4) 将洗涤液换为新鲜配制的洗膜液II,根据SSO探针的Tm值决定洗涤温度,通常在51℃~60℃之间,洗涤10分钟左右。用放射检测仪监测洗膜的过程,并调整洗涤的时间
【注意事项 】
(1) 洗膜条件对于SSO分型结果的判断十分重要,不同的探针洗涤条件差异较大,影响因素包括洗涤液的离子强度、洗涤温度、摇动速度等,通常需要反复摸索才能掌握。
(2) 放射性物质的操作应严格遵守有关规定和采取适当的防护措施。