PCR-SSO预杂交和杂交
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PCR-SSO 预杂交和杂交
【材料和试剂】
（1） 50 X Denhardt：2.5g聚蔗糖400，2.5g聚乙烯吡咯烷酮（PVP），2.5g牛血清白蛋白（BSA），加蒸馏水250ml。
（2） 预杂交液：5XSSPE，5Xdenhardt液，0.5%SDS，100ug/ml变性并裂解的鲑精DNA。
（3） 50%甲酰胺
（4） 10 X SSPE（p H 7.4）：100mmol/L NaH2PO4，1.5mol/L NaCl，1mmol/L EDTA。
（5） 固定有样本DNA的尼龙膜
（6） 标记的SSO探针
（7） 杂交炉或杂交袋
（8） 恒温水浴摇床（80rpm，有盖，温度可调至65℃）
（9） 精确温度计（精度为±0.1℃）
（10） 可调加样器（1～20ul，20～200ul，200～1000ul）
【操作步骤】
预杂交和杂交可以在杂交炉或杂交袋中进行。
（1） 将固定有样本DNA的尼龙膜用2XSSPE浸润后放入杂交管或杂交袋中，有重叠时应用专用筛网隔开；
（2） 加入预杂交液：用杂交袋时，按每平方厘米0.2ml计算；用杂交管时，加入的杂交液以旋转时杂交管中的尼龙膜被覆盖为准。注意不能有气泡存在于液体之中；
（3） 42℃预杂交10分钟至1小时；
（4） 取出杂交袋或杂交管，在上述预杂交液中加入标记的SSO探针进行杂交，加入探针量为1ul/ml（预）杂交液；
（5） 42℃杂交1小时至过夜。
【注意事项】
（1） 如果杂交液中不含甲酰胺，杂交应在68℃进行，此时杂交较为严格。
（2） 在预杂交和杂交过程中，尼龙膜接触（或覆盖）的杂交液中应该无气泡。
（3） 放射性物质的操作应严格遵守有关规定和采取适当的防护措施。
