血管内皮细胞原代培养

   内皮细胞易于从大血管分离培养成单层细胞，对于研究内皮细胞再生、肿瘤促血管生长因子（ TAF ）等有很大价值。
  研究人内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法最为简便，其法如下：
1 、产后新鲜脐带，无菌剪取 10 ― 15 厘米长一段，如不能立即培养，可于 12 小时内保存于 4 ℃。
2 、用三通注射器吸取温 PBS 液注入脐静脉中洗去残血，在入口处用线绳扎紧，以防液体返流。
3 、用血管钳夹紧脐带一端，从另一端向脐静脉中徐徐注入终浓度为 0.1% 的粗制胶原酶，充满血管，消化 3 ― 10 分钟；注入口用线绳扎，以防液体返流。
4 、吸出含有内皮细胞的消化液，于离心管中，注入温 PBS 轻轻反复冲洗后，一并注入离心管中（此步骤可重复）。 5 、离心去上清，加入 RPMI1640 培养液制成细胞悬液，接种入培养器皿中，置温箱培养。两至三天可见细胞长成单层。