稳定转染发现的问题

犯罪现场调查：最近作稳定转染的筛选。发现一个问题。绿色荧光细胞总是在没转染成功的细胞附近生长。而且，混合生长。怎么才能分离？难道加大418的浓度？

丁香园网友chenlydd认为：

G418加压后活下来的细胞都是转染成功的。不表达绿色荧光的细胞不代表没有转染成功，该细胞只表达新霉素磷酸转移酶基因，因而对G418产生抗性，只是该细胞不表达目的基因。

分离只表达目的基因的细胞最好用９６孔板用有限稀释法来获得单克隆。细胞培养板在铺细胞前最好先铺一些滋养细胞。滋养细胞来制小鼠腹腔。

杀死一只小鼠，用７０%酒精消毒，然后打开腹腔，用２０ml培养基清洗腹腔，然后把腹腔清洗液取出铺板，一只小鼠腹腔清洗液能够铺２－３块９６孔板。第二天再铺稳定转染的细胞，一个孔最好铺２－３个细胞。长出单克隆的细胞再扩大转代培养。