试验用gelred代替EB,试验不理想,求助!!
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问:实验室最近用gelred代替EB,我是直接把gelred稀释到6X Loading Buffer 中,2ml上样缓冲液加分别加入1微升,2微升--10微升的gelred,同时marker充当样品点样。结果跑出来的条带悲剧了,puc57的条带显示在3000以上,也就是样品跑得慢,marker跑得快!而且跑双marker时,显示的条带也不一致。还试验了另一种方案,做胶时直接把gelred加到溶胶液中,50ml的溶胶液加5微升的gelred,跑出来的条带更离谱,效果更差。谁能给点我意见,让我参考参考,咱们一起讨论讨论,谢了!
答:你这样试一下 倒一块胶(不加染料),浓度略大一点点如1.5%,然后等凝固以后把梳子拔起来(选用稍微宽一点的孔齿),把胶一分为二留一半在倒胶槽里,插回梳子,另半边倒入加了染料的琼脂糖溶液,凝固后成为一块。找两个回收片段(一个200左右,一个1500左右),在没染料的一边往样本中加染料然后点样,另一边常规点样,电泳看看结果,然后我们再来判定这个染料适合的使用方式是什么。 (责任编辑:大汉昆仑王) |