【求助】如何做siRNA干扰试验,急!
丁香园论坛
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本人对试验基本不通,刚要开始做试验,涉及到siRNA干扰技术,上网查了一下,可是不是很明白。求助各位朋友教教我。试验大概要分别干扰3个不同的基因表达,在肿瘤细胞中做,是用体外转录siRNA还是shRNA表达载体好?我都要准备什么?
干扰掉直接做wb或者其他检测的话 化学合成的就够了
细胞只能用一次
一般不会传代 做一次实验就要转染干扰一次
要做后期实验
比如干扰后一周要用细胞的话
shRNA表达载体咯 普通质粒的话 一周以内也凑合 但一般需要你转染效率的数据
也不适合传代
有抗性的话 可以挑单克隆 但假阳性很多 每株细胞你得挑3个单克隆吧
工作量太大
要一劳永逸的话 慢病毒稳转shRNA比较合适
包装好感染一次基本能稳定干扰
细胞传代 冻存什么也没问题
细胞只能用一次
一般不会传代 做一次实验就要转染干扰一次
要做后期实验
比如干扰后一周要用细胞的话
shRNA表达载体咯 普通质粒的话 一周以内也凑合 但一般需要你转染效率的数据
也不适合传代
有抗性的话 可以挑单克隆 但假阳性很多 每株细胞你得挑3个单克隆吧
工作量太大
要一劳永逸的话 慢病毒稳转shRNA比较合适
包装好感染一次基本能稳定干扰
细胞传代 冻存什么也没问题
i haven't your meaning
开始做了吗?加我的Q24289096
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