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【求助】如何做siRNA干扰试验,急!

丁香园论坛

3601
本人对试验基本不通,刚要开始做试验,涉及到siRNA干扰技术,上网查了一下,可是不是很明白。求助各位朋友教教我。试验大概要分别干扰3个不同的基因表达,在肿瘤细胞中做,是用体外转录siRNA还是shRNA表达载体好?我都要准备什么?
干扰掉直接做wb或者其他检测的话 化学合成的就够了
细胞只能用一次
一般不会传代 做一次实验就要转染干扰一次

要做后期实验
比如干扰后一周要用细胞的话
shRNA表达载体咯 普通质粒的话 一周以内也凑合 但一般需要你转染效率的数据
也不适合传代

有抗性的话 可以挑单克隆 但假阳性很多 每株细胞你得挑3个单克隆吧
工作量太大

要一劳永逸的话 慢病毒稳转shRNA比较合适
包装好感染一次基本能稳定干扰
细胞传代 冻存什么也没问题
i haven't your meaning
开始做了吗?加我的Q24289096

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