【原创】真假GelRed对比试验
丁香园论坛
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<strong><font>真假GelRed风波</font></strong><br />
目前，美国Biotium中国区唯一总代理商接到一些客户投诉，声称从某些经销商那里买到了假货GelRed产品，实验效果很不理想。</center>
由此，总代理公司受美国总公司方面委托，一方面致电新老客户当心假货，建议从正规渠道购买原装产品；另一方面安排实验部门开展核酸凝胶电泳实验，帮助广大客户鉴别真假GelRed。
目前市场上几种代表性的核酸染料：
GelRed是一款集高灵敏度、低毒性和光稳定性于一体的核酸凝胶染料。由于染料分子不能透过人体细胞膜，保证了实验环境的安全与洁净。该产品已通过美国环保局安全认定，废弃物可直接倒入下水道，不会造成任何环境污染。
EB (溴化乙啶）是早期分子实验中常用的小分子核酸凝胶染色剂，但染色效果并不灵敏，背景荧光信号太强，分辨率不高。最重要的EB是一种高诱变性致癌的化学物质。
SYBR Green I和 SYBR Gold 也被厂家宣传为灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解，稳定性差导致染色效果极不可靠。 SYBR safe 虽然被认为安全，但它的染色灵敏度远远达不到标准。
Goldview从对比试验结果来看，该产品就是AO（丫啶橙，一种剧毒致癌产品，且荧光亮度不佳）。请看Goldview 与 AO 对比试验结果（其中Goldview是从国内某公司采购，AO则来自SIGMA，报告来自总代理）
下面看一下实验结果：（报告来自中国区总代理）
结果一：
图一结果显示：采用同样的样品及电泳条件（点泳池中跑4块25ml的凝胶）：
美国原装GelRed实验效果最好，原装GelRed染色背景低，染料灵敏度高，分辨率强。
而某假货GelRed和EB背景亮度相当。另外在使用过程中：发现biotium的GelRed染料呈鲜艳的紫红色，加入后极易扩散，不会挂在烧瓶壁上，而假货生物的染料呈暗淡的红色偏褐，加入时不易扩散，需摇晃才能扩散，且扩散后颜色偏土黄。
就实验特征而言，假货经销商的gelred和EB的添加效果非常相似，怀疑其中有添加EB或goldview。
图1 原装GelRed、假货GelRed、DuRed及EB四种核酸凝胶染料的效果对比图。所使用的样品均采用小片段质粒（浓度100ng/ul，上样量均为3ul）；marker采用天根生化的DNAmarker 3；染料使用量均为1ul染料加入25ml琼脂糖凝胶中；条件 1%浓度的琼脂糖凝胶，电压150V；400A 时间为20min。EB采用泡染法染色8min。
结果二：
图二就推荐浓度问题做了对比试验，结果表示：按照推荐浓度（1:10000，如2.5 ul加入到25ml胶中），GelRed染料由于染料分子偏大，会对marker的大片段迁移有一定影响，偶尔会造成拖带，微笑条带等情况。但是小片段分离效果较好；
另外某假货经销商的假货GelRed小条带几乎弥散，消失不见了。
图2 原装GelRed与假货GelRed染料按照推荐浓度跑胶效果对比图。所使用的样品均采用小片段质粒（浓度100ng/ul，上样量均为3ul）；marker采用天根生化的DNAmarker 3；染料使用量均为2.5 ul染料加入25ml琼脂糖凝胶中；条件 1%浓度的琼脂糖凝胶，电压150V；400A 时间为20min。
综合以上结果，可以看出：
1. 假货GelRed背景很亮与EB相似，使用颜色又有点偏向GoldView红褐色；怀疑假货中掺入的是致癌诱变染料EB与GoldView的混合物；而且小片段容易弥散，消失。
2. 原装GelRed的最佳使用浓度为 2ul加入到50ml胶，1ul加入25ml胶中（图一）。说明书中推荐浓度使用染料时，偶尔会影响大片段DNA的迁移。
总代理建议广大用户从厂商购买安全的原装产品，避免上当受骗。
由此，总代理公司受美国总公司方面委托，一方面致电新老客户当心假货，建议从正规渠道购买原装产品；另一方面安排实验部门开展核酸凝胶电泳实验，帮助广大客户鉴别真假GelRed。
目前市场上几种代表性的核酸染料：
GelRed是一款集高灵敏度、低毒性和光稳定性于一体的核酸凝胶染料。由于染料分子不能透过人体细胞膜，保证了实验环境的安全与洁净。该产品已通过美国环保局安全认定，废弃物可直接倒入下水道，不会造成任何环境污染。
EB (溴化乙啶）是早期分子实验中常用的小分子核酸凝胶染色剂，但染色效果并不灵敏，背景荧光信号太强，分辨率不高。最重要的EB是一种高诱变性致癌的化学物质。
SYBR Green I和 SYBR Gold 也被厂家宣传为灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解，稳定性差导致染色效果极不可靠。 SYBR safe 虽然被认为安全，但它的染色灵敏度远远达不到标准。
Goldview从对比试验结果来看，该产品就是AO（丫啶橙，一种剧毒致癌产品，且荧光亮度不佳）。请看Goldview 与 AO 对比试验结果（其中Goldview是从国内某公司采购，AO则来自SIGMA，报告来自总代理）
下面看一下实验结果：（报告来自中国区总代理）
结果一：
图一结果显示：采用同样的样品及电泳条件（点泳池中跑4块25ml的凝胶）：
美国原装GelRed实验效果最好，原装GelRed染色背景低，染料灵敏度高，分辨率强。
而某假货GelRed和EB背景亮度相当。另外在使用过程中：发现biotium的GelRed染料呈鲜艳的紫红色，加入后极易扩散，不会挂在烧瓶壁上，而假货生物的染料呈暗淡的红色偏褐，加入时不易扩散，需摇晃才能扩散，且扩散后颜色偏土黄。
就实验特征而言，假货经销商的gelred和EB的添加效果非常相似，怀疑其中有添加EB或goldview。
图1 原装GelRed、假货GelRed、DuRed及EB四种核酸凝胶染料的效果对比图。所使用的样品均采用小片段质粒（浓度100ng/ul，上样量均为3ul）；marker采用天根生化的DNAmarker 3；染料使用量均为1ul染料加入25ml琼脂糖凝胶中；条件 1%浓度的琼脂糖凝胶，电压150V；400A 时间为20min。EB采用泡染法染色8min。
结果二：
图二就推荐浓度问题做了对比试验，结果表示：按照推荐浓度（1:10000，如2.5 ul加入到25ml胶中），GelRed染料由于染料分子偏大，会对marker的大片段迁移有一定影响，偶尔会造成拖带，微笑条带等情况。但是小片段分离效果较好；
另外某假货经销商的假货GelRed小条带几乎弥散，消失不见了。
图2 原装GelRed与假货GelRed染料按照推荐浓度跑胶效果对比图。所使用的样品均采用小片段质粒（浓度100ng/ul，上样量均为3ul）；marker采用天根生化的DNAmarker 3；染料使用量均为2.5 ul染料加入25ml琼脂糖凝胶中；条件 1%浓度的琼脂糖凝胶，电压150V；400A 时间为20min。
综合以上结果，可以看出：
1. 假货GelRed背景很亮与EB相似，使用颜色又有点偏向GoldView红褐色；怀疑假货中掺入的是致癌诱变染料EB与GoldView的混合物；而且小片段容易弥散，消失。
2. 原装GelRed的最佳使用浓度为 2ul加入到50ml胶，1ul加入25ml胶中（图一）。说明书中推荐浓度使用染料时，偶尔会影响大片段DNA的迁移。
总代理建议广大用户从厂商购买安全的原装产品，避免上当受骗。
