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通过琼脂糖凝胶电泳可以看到pcr结果,设置阴阳对照可以区分真假阳性,通常情况下阴性对照设置成水对照,即体系中不加入DNA模板,如果阴性对照无条带,结果更加可信
灵枢天问
电泳看。真假阳pcr单克隆,培养后进行提质粒,酶切,电泳鉴定是否有目标片段插入,可以避免假阳性。
另外,最保险的办法就是,酶切确认过的克隆,再送去测个序,保证目标片段的序列是完全正确的。
当然,也可以直接取几个单克隆去测序,看哪一个是阳性。
汤姆卜丽波
跑琼脂糖凝胶,你应该知道自己的目的基因多大吧,真假阳需要提质粒做酶切验证
秋秋欣欣
红色是一条内参线这样是阴性结果
在严格质控,内参正常的情况下,同时出现了几个曲线,这样的一个样本判断我阳性。
bamboopiggy
做pcr要加阳性对照和阴性对照,就可以区分结果了
迟C迟
根据扩增片段大小对应Marker,如果片段大小正确,基本问题不大。
实在不放心,可以连接通用载体去测序,根据测序结果判断扩增片段是否正确。
未来9
PCR结束了进行电泳。
琼脂糖电泳,用mark标记,dna的大概长度,看和目的片段是否一致。
如不一致,定是假阳性,如一致还不确定还可继续使用,聚丙烯酰胺凝胶电泳,将双链解离再次进行电泳。和生物公司合成的目的片段进行对比。如果结果一致,可以有98%的概率认为目的产物和所需产物一致。
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