重组病毒扩增和纯化

1. 75cm2方瓶中接种 293 细胞，至密度达到 90%，加入适量病毒上清感染细胞。 3- 4d 后，细胞几乎变圆，且有一半细胞漂浮，则收集所有细胞。约500g 转速离心，弃上清。

2. 以灭菌 PBS 重悬沉淀，反复冻融4 次。4℃下 7000g 离心 5min.病毒纯化至少 需要 30 瓶 75cm2方瓶细胞。

3. CsCl 连续梯度离心纯化：50ml 离心管中称量 4.4g CsCl，加入 8ml 病毒裂解 上清液，混匀，体积约为10ml。转移至12ml 超速离心管（用于SW41 转头） 中，覆盖约2ml 矿物油。平衡后，10℃下 32000 rpm 离心 18-24hr，用注射器 抽吸离心出的病毒带。

（也可 CsCl 不连续梯度离心：20ml 超速离心管中缓慢加入 8mlCsCl 1.4 (53 g +87 mL 10 mM Tris-HCl，pH=7.9)， 上面小心加入6 mL CsCl 1.2 (26.8 g + 92 mL ；10 mM Tris-HCl，pH=7.9)， 再小心加入病毒上清液至体积达到20ml。平衡后，4℃下 23000rpm 离心 90min (SW28 转头) ，用注射器抽吸下层蓝白色病毒带）

4. 病毒透析去盐：配置透析液（10 mM TrispH 8.0, 2 mM MgCl2 , 5% sucrose），灭菌处理。4℃透析，更换3次透析液，可基本去除CsCl，病毒保存于- 80℃。