牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-消化刮脱法

      实验材料：
      1. 牛或猪
      2. PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml
      3. 0.1%Ⅰ型胶原酶
      4. 眼科剪，眼科镊
      5. 慕丝线
      6. 离心管（15ml、50ml）

实验方法：
      1. 分离牛或猪的主动脉等大血管，长15-20cm，用丝线结扎血管各分支后，取出主动脉。放入盛有含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml的PBS平皿中，纵向切开血管壁，内皮朝上，用PBS冲洗3次。
      2. 在另一平皿中加入少量0.1%Ⅰ型胶原酶溶液。37℃下消化5-10min，然后加入培养液终止消化。
      3. 刮取内皮细胞。用刮刀轻轻刮内膜表面，刮刀与血管表面成60°，刮刀要轻而均匀地推进。不可刮得过深，也不要刮到血管的边缘处，以免成纤维细胞被污染。
      4. 将刮下的内皮细胞悬液浮于培养液中，1000r/min，离心10min。吸去上清；再加入15ml培养液，用滴灌轻轻吹打，以便分散细胞团，再离心1次，并吸去上清。加入5ml培养液悬浮细胞，制备细胞悬液。