牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-灌注酶消化法

实验材料：

1. 牛或猪

2. PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml

3. 0.1%Ⅰ型胶原酶

4. 眼科剪，眼科镊

5. 慕丝线

6. 离心管（15ml、50ml）

实验方法：

1. 分离牛或猪的主动脉等大血管，长15-20cm，用丝线结扎血管各分支后，取出主动脉。放入含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml的PBS中，清洗血管，洗净血迹。

2. 用眼科剪和眼科镊剔除血管外膜的脂肪和结缔组织，用加入抗菌素的PBS冲洗三次。

3. 从血管动脉端注入0.1%Ⅰ型胶原酶溶液，待血管内残留的PBS全部流出后，结扎血管静脉端，继续注入胶原酶溶液，使血管充盈。在室温下消化约30min。

4. 将血管内消化液收集到灭菌的离心管内，1000r/min，离心10min。吸去上清，加入培养液制成细胞悬液。调整细胞密度至1.5×105 个/ml。