细胞介导细胞毒作用检测法-用MTT检测法测定CMC

用 MTT 检测法测定 CMC

1． Fen 细胞培养 于含10％小牛血清的RPMI-1640培养液中，在25cm ² 培养瓶中生长到接近汇合。用含0.05％胰蛋白酶，0.02％ EDTA的PBS消化细胞5分钟，洗涤后，用 细胞培养 液将细胞配成1×10 ⁵ /ml。

2． 取96孔 细胞培养 板，每孔加0.1ml细胞悬液，在37℃ 5％ CO ₂ 的饱和水汽二氧化碳培 养箱中培养24小时，让细胞帖壁。每孔加0.1ml效应细胞悬液，效靶比10：1到50：1，继续培养4小时，让效应细胞发挥杀伤效应。实验中，设立只有靶细胞的无杀伤对照和只有 效应细胞的阴性对照，每种处理设3各复孔。

3． 用含2％小牛 血清 的RPMI-1640培养液洗涤各孔 3次，洗去不粘附的细胞。每孔加 0.1ml含2％小牛 血清 的RPMI-1640培养液和10μl 5mg/ml的MTT染液，继续培养3小时。

4． 用PBS洗涤2次，每孔加0.1ml含0.04mol/L HCl的异丙醇，室温30分钟，溶解形成的结晶。在570nm波长处，用酶联检测仪检测各孔的光吸收值（OD）。

杀伤活性（％）＝（OD实验孔－OD阴性对照） /OD无杀伤对照× 100