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ELISA检测法进行筛选时,阴性对照孔

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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梁工1315

ELISA检测法进行筛选时,阴性对照孔(取未长杂交瘤的3个板孔里的培养基),显色值也比较高,0.49左右,是不是因为体系里未融合的浆细胞分泌的抗体干扰检测结果的原因?这种现象是否常见?

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3 个回答

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sswei

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Elisa法筛选时,阴性对照孔显色值较高,常常是因体系里未融合浆细胞分泌抗体干扰检测结果。

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土井挞克树

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常见,建议把未融合的浆细胞抗体融合,就会有所改善

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loveliufudan

有帮助

在ELISA实验中,阴性对照孔应该是不含目标分子(如抗体)的孔,通常使用纯净的培养基或缓冲液。然而,如果阴性对照孔的显色值比较高,接近阳性样本的显色值,可能存在一些干扰因素。

一种可能的干扰因素是未长杂交瘤的浆细胞分泌的抗体。即使细胞没有融合,浆细胞仍然可以分泌抗体。这些抗体可能与检测过程中使用的检测抗体或其他试剂发生非特异性结合,导致阴性对照孔的显色值升高。

这种现象在ELISA实验中是有可能发生的,尤其是当使用细胞培养基作为阴性对照时。未融合的浆细胞分泌的抗体可能存在于培养基中,与检测体系中的抗体发生非特异性结合。

为了排除这种干扰,可以考虑采取以下措施:

1. 使用更适合的阴性对照:除了未长杂交瘤的培养基,可以考虑使用不含抗体的纯净培养基或其他合适的阴性对照。

2. 优化实验条件:优化ELISA实验的各个步骤,包括洗涤、孵育和显色等步骤。确保正确的试剂浓度和适当的孵育时间,以最大程度地减少非特异性结合。

3. 引入更严格的阴性对照组:可以引入额外的阴性对照组,例如使用无关抗体或其他非相关样本作为阴性对照。

如果这种现象仍然存在,可能需要进一步优化实验条件或考虑使用其他方法来排除干扰因素,并确保获得准确的ELISA结果。

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