细胞介导细胞毒作用检测法5:用MTT检测法测定CMC
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用 MTT 检测法测定 CMC
1. Fen 细胞培养于含 10 %小牛血清的 RPMI-1640 培养液中,在 25cm2 培养瓶中生长到接近汇合。用含 0.05 %胰蛋白酶, 0.02 % EDTA 的 PBS 消化细胞 5 分钟,洗涤后,用细胞培养液将细胞配成 1 × 105 /ml 。
2. 取 96 孔细胞培养板,每孔加 0.1ml 细胞悬液,在 37 ℃ 5 % CO2 的饱和水汽二氧化碳培 养箱中培养 24 小时,让细胞帖壁。每孔加 0.1ml 效应细胞悬液,效靶比 10 : 1 到 50 : 1 ,继续培养 4 小时,让效应细胞发挥杀伤效应。实验中,设立只有靶细胞的无杀伤对照和只有 效应细胞的阴性对照,每种处理设 3 各复孔。
3. 用含 2 %小牛血清的 RPMI-1640 培养液洗涤各孔 3 次,洗去不粘附的细胞。每孔加 0.1ml 含 2 %小牛血清的 RPMI-1640 培养液和 10 μ l 5mg/ml 的 MTT 染液,继续培养 3 小时。
4. 用 PBS 洗涤 2 次,每孔加 0.1ml 含 0.04mol/L HCl 的异丙醇,室温 30 分钟,溶解形成的结晶。在 570nm 波长处,用酶联检测仪检测各孔的光吸收值( OD )。
杀伤活性(%)=( OD 实验孔- OD 阴性对照) /OD 无杀伤对照× 100