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1、零点的校正
在测定样品前，需先校正旋光仪的零点。将样品管洗净，装上蒸馏水，使液面凸出管口，将玻璃盖沿管口边缘轻轻平推盖好，不能带入气泡，然后旋上螺丝帽盖，不漏水，不要过紧。将样品管擦干，放入旋光仪内，罩上盖子，开启钠光灯，将标尺盘转到零点左右，旋转粗动、微动手轮，使视场内Ⅰ和Ⅱ部分的亮度均匀一致，记下读数。重复操作至少五次，取其平均值，若零点相差太大，应重新校正。
2、旋光度的测定
准确称取10g样品（如糖），定量配制在100ml容量瓶中，依上法测定其旋光度（测定之前必须用该溶液洗旋光管两次，以免有其它物质影响）。这时所得的读数与零点之间差值即为该物质的旋光度。记下样品管的长度及溶液的温度，然后按公式计算其比旋光度。
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