请教关于怎样通过定量PCR检测点突变!!!
丁香园论坛
老板给定了一课题,希望能通过定量PCR来检测一病原真菌对药剂的抗药性。该病原真菌的抗药性由其β-维管蛋白基因的881位的点突变引起。
该菌抗药性β-维管蛋白基因序列为:ATGCGTGAGATTGTGAGTGTTTTCCTCTGACCTCTAACTTCAAGCTGTTGCATGCGTTGAGCTTGTGTTTTGTGCCCTTGATTGTACCCCGCCGGGCGGTGGCAGCTCAACAACAATGCATGATAGCTCGCAGCTTGATCAGTATTCTTCCCCGGAAACAAGAGAAGCTAACCTTGCCTTTTTCTTTGCGGTAGGTTCACCTTCAGACCGGTCAGTGCGTAAGTATTCATCTGCTCTTCCATCTCGTCGGAGGGAGTTTCTAACAATGTTTATTAGGGTAACCAAATCGGTGCTGCTTTCTGGCAGACCATCTCTGGCGAGCACGGTCTCGACAGCAATGGTGTTTACAACGACACCTCTGAGCTCCAGCTCGAGCGCATGAGCGTTTACTTCAACGAGGTTTGTTCAGTCACTACTGCCACGAAAAACACAAGCTCACGCATGTAGGCCTCCGGTAACAAGTATGTTCCCCGTGCCGTTCTCGTCGATTTGGAGCCAGGTACCATGGATGCCGTCCGTGCTGGTCCTTTCGGTCAACTCTTCCGCCCAGATAACTTCGTTTTCGGTCAATCCGGTGCTGGTAACAACTGGGCTAAGGGTCATTACACTGAGGGTGCTGAGCTTGTCGACCAAGTTCTTGATGTCGTTCGTCGTGAGGCTGAGGGCTGTGACTGCCTTCAAGGTTTCCAAATCACCCACTCTCTCGGTGGTGGAACTGGTGCCGGTATGGGTACGCTTTTGATTTCCAAGATCCGTGAGGAGTTCCCAGATCGTATGATGGCTACCTTCTCCGTCGTCCCATCGCCAAAGGTTTCCGATACCGTCGTCGAGCCATATAACGCTACTCTCTCTGTTCATCAATTGGTCGAGAACTCTGACGCGACCTTCTGTATCGACAACGAGGCTCTCTACGACATTTGCATGAGAACCTTGAAGCTCAGCCACCCATCCTACGGAGATCTTAACCACTTGGTCTCCGCTGTCATGTCCGGTGTTACCACCTGTCTCCGTTTCCCTGGTCAACTTAACTCAAATCTCCGAAAGTTGGCTGTCAACATGGTTCCATTCCCCCGTCTTCATTTCTTCATGGGTGGATTTGCTCCTTTGACCAGTCGTGGCGCACACTCTTTCCGTGCTGTTACTGTTCCAGAGTTGACCCAACAAATGTATGATCCTAAGAACATGATGGCCGCTTCCGATTTCCGTAACGGTCGTTACTTAACCTGCTCTGCTATCTTGTAAGTTTGCCATATTACCCGTCTGCAGCTCTATATATACTAATCGTGTGCAGCCGTGGTAAGGTTTCCATTAAGGAGGTTGAGGACCAAATGCGCAATGTCCAAAACAAGAACTCTTCCTACTTCGTCGAGTGGATCCCTAACAATGTCCAAACCGCCCTTTGCTCCATTCCTCCCCGTGGTCTCAAGATGTCCTCCACCTTCGTCGGTAACTCGGCCTCCATCCAAGAACTCTTCAAGCGTGTCGGTGATCAATTCACTGCTATGTTCAGAAGAAAGGCTTTCTTGCATTGGTACACTGGCGAAGGTATGGACGAAATGGAGTTCACTGAGGCTGAGTCCAACATGAACGATTTGGTCTCCGAGTACCAACAATACCAAGATGCCTCGATCTCTGAGGGAGAGGAGGAGTACGAAGAGGAAGCCCCAATTGAGGGCGAGGAATAG
我现在用的引物为S:5'-TCTCGGTGGTGGAACTGGTG-3' A:3'-CGGTGGGTAGGATGCCTCTA-5';扩增片段为702-960位,共259bp。881位的点突变为碱基A突变为C。
我原希望能分别设计敏感和抗性Taqman-probe来检测,可在查询了资料和在向一些公司咨询后发现困难很大!
不知有没有朋友做过相似的课题或对此有所了解,希望能帮帮我!!!
不知Taqman-MGB-probe怎样?特别希望您能在探针的设计方面多指点指点小弟!!!
不胜感激!