随机引物法探针标记

随机引物法的原理是使被称为随机引物(random primer)的长6个核苷酸的寡核苷酸片段与单链DNA或变性的双链DNA随机互补结合(退火)，以提供3， 羟基端，在无5， →3， 外切酶活性的DNA聚合酶大片段(如Klenow片段)作用下，在引物的3， 羟基末端逐个加上核苷酸直至下一个引物。当反应液中含有标记的核苷酸时，即形成标记的DNA探针。6个核苷酸混合物出现所有可能结合序列，引物与模板的结合以一种随机的方式发生，标记均匀跨越DNA全长。当以RNA为模板时，必须采用反转录酶，得到的产物是标记的单链cDNA探针。随机引物法标记的探针比活性高，但标记探针的产量比缺口平移法低。

DNA探针的随机引物法标记原理图