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荧光探针标记法

相关实验:细胞膜流动性测定实验

最新修订时间:

原理

常用于研究膜脂流动性的荧光探针为1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)。DPH掺入到细胞膜脂烃链区后,介质粘度增加,顺反异构受到抑制,成为唯一能发光的全反构型。

材料与仪器

肿瘤细胞
磷酸盐缓冲液 DPH
荧光分光光度计 离心机

步骤

1.  取对数生长期的肿瘤细胞,以pH7.2,0.01 mol/l 磷酸盐缓冲液洗涤两次。

2.  取107个细胞,离心,加入2×106 mol/l DPH溶液2 ml。

3.  25℃振荡温育30 min,再以PBS洗涤1次。

4.  悬浮于4 ml PBS溶液中。

5.  测定仪器为荧光分光光度计,在激发波长362 nm,发射波长432 nm,狭缝10条件下测定荧光强度。

注意事项

由于DPH可进入细胞内部,后来又合成了其阳性离子衍生物1-(4-三甲胺苯基)-6-苯基-1,3,5-己三烯(TMDPH)。TMDPH不能透过细胞膜进入细胞,因此,理论上TMDPH标记法较DPH标记法更能准确的反映膜脂流动性。

来源:丁香实验

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