免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation)：分泌型IgA的分离与鉴定

（一）材料与试剂

 

1 ．初乳

2 ． SephadexG200

3 ． 0.10Mol/L pH6.8PB 液

4 ． 0.01Mol/L pH7.4PB 液

5 ． DEAE₅₂

（二）操作方法

1 ．取初乳 20ml ， 10 000rpm 离心 10min ，弃去表面脂肪层及底部的沉淀物。

2 ．取乳清过 SephadexG200 柱（柱规格为 2.50cm × 90cm ），以 0.10Mol/L pH6.8PB 液洗脱，第一峰为 IgA （含 IgG ）。

3． 收集乳液，于 0.01Mol/L pH7.4PB 液中透析。

4． 将透析液浓缩至 5mg/ml 以上。

5． 过 DE₅₂ 层析柱，用 0.01Mol/L pH7.4PB 液洗脱，洗下蛋白峰为 IgG ，弃去。

6． 换用 0.10Mol/L pH6.8PB 液或 0.01Mol/L pH7.4PBS （ 0.10Mol/L NaCl ）液洗脱，

收集洗脱液 ，即为较纯的 IgA 液。

7． 必要时，可再过一次 SephadexG200 柱。

8． 浓缩，鉴定