MTT比色法
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[基本原理]
MTT法是Mosmann 1983年报道的,以后此方法得到了迅速发展并广泛应用于临床与科研研究。其原理是活细胞内线粒体脱氢酶能将四氮唑化合物(MTT)由黄色还原为蓝黑色的甲肷,甲肷的生成量与细胞的增殖程度呈正相关。后者溶于有机溶剂(如二甲亚枫或酸化异丙醇等),并可在560nm波长下进行检测。
[试剂及材料]
(1)MTT:用PBS配成5mg/ml的存储液,过滤除菌,4℃保存。
(2) 溶剂:二甲亚枫(DMSO)。
(3)酶标仪
(4)其余试剂同前。
[操作方法]
(1)刺激增殖反应同前;
(2)于终止培养前,每孔加入MTT 10μl,混匀后再培养4~6h;
(3)吸弃上清液,每孔加入溶剂(DMSO)100μl,稍振荡待甲肷产物充分溶解
(4)在酶标仪上,测定OD560nm ;
[结果分析]
计算SI:SI=试验孔OD均值/对照孔OD均值