条件性基因敲除的基本原理Flp/FRT系统
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该系统与Cre/loxP系统相同,也是由一个重组酶 和一段特殊的DNA序列组成。从进化的角度上考虑,Flp/FRT系统是Cre/loxP系统在真核细胞内的同源系统。其中.重组酶Flp是酵母细胞内的一个由423个氨基酸组成的单体蛋白。与Cre相似,Flp发挥作用也不需要任何辅助因子,同时在不同的条件下具有良好的稳定性。
该系统的另一个成分Flp识别位点(Flp recognition target,FRT)与loxP位点非常相似,同样由两个长度为13bp的反向重复序列和一个长度为8 bp的核心序列构成。在该系统发挥作用时,FRT位点的方向决定了目的片段的缺失还是倒转。这两个系统比较明显的区别是它们发挥作用的最佳温度不同,Cre重组酶发挥作用的最佳温度为37℃,而Flp重组酶为30℃。因此,Cre/loxP系统最适宜在动物体内使用。loxP和FRT位点的序列如图所示。