5-脂氧酶测定方法

问：试验做5脂氧酶的体外酶活试验，用于对药物的筛选，但是测定方法如果采用试剂盒的话，价格很贵，请教各位有谁做过比较方便的测定方法，希望大家给予帮助，谢谢！

答：酶活的测定：0.2ｍＬ酶液移入20℃，0.8ｍＬ底物（底物配制：0.25ｍＬ吐温20分散于10ｍＬｐＨ9.0的0.2Ｍ硼酸盐缓冲液中，摇动下逐滴加入0.27ｍＬ的亚油酸，充分混匀使亚油酸的微细状体分散于液体中，加入1Ｎ氢氧化钠1.0ｍＬ摇动使体系成为清澈透明的溶液，用浓盐酸调ｐＨ至9.0，然后用上述硼酸盐缓冲液稀释到500ｍＬ），混匀后于25℃下保温4ｍｉｎ，用2ｍＬ无水乙醇终止反应，加入2ｍＬ蒸馏水混匀后于分光光度计234ｎｍ处1ｃｍ比色皿测吸光度。空白则先加2ｍＬ无水乙醇，其余同上。酶活的定义：在20℃，ｐＨ9。0，234ｎｍ处，以亚油酸为底物时，反应体系每分钟增加吸光度0。001为一个活力单位。

请参考以下文献：脂肪氧合酶提取工艺的研究.CAJ