IgA的分离与提纯

互联网2013-11-14

1305

（一）材料与试剂配制

1．DEAE52纤维素

2．0.10Mol/L ZnSO₄ 液

ZnSO₄ ·7H₂ O 2.88g

加水至1 000.00ml

3．饱和硫酸铵溶液

4．10％EDTA—Na

5．SephadexG200

6．0.01Mol/L pH7.4PB液

7．0.10Mol/L pH6.4PB液

8．血清

（二）操作方法

1．取血清加等量的0.1Mol/L ZnSO₄ 液，调pH至7.0，室温搅拌1h，离心去沉淀。

2．于上清液中加入等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置30min或冰箱过夜。

3．10 000r/min离心10min，去上清。

4．取沉淀溶于4ml10％EDTA－Na溶液中。

5．生理盐水中透析除盐。

6．过DE₅₂ 柱，用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脱蛋白（IgG）弃去。

7．换用0.1Mol/L pH6.4PB液洗脱，收集蛋白峰，即为IgA。

8．再过SephadexG200柱，洗液为0.01Mol/L pH7.4PBS（0.14Mol/L NaCl），收集洗脱液测OD₂₈₀ 值，取第一峰即为纯化IgA。

9．透析、浓缩、鉴定。

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