HRP标记

问：有没有做辣根过氧化物标记的朋友啊，能不能把你们的步骤发给我。本人开始做，发现很多人用的浓度都不一样。

答：1.1 试剂准备

1) 10mg/mL HRP

2) 0.06mol/L NaIO4

3) 0.16mol/L乙二醇

4) 碳酸盐缓冲液(Na2CO3 0.7952g NaHCO3 1.4702g 溶于500mL蒸馏水中，调pH值到9.5)

5) 2.5mg/mL NaBH4

6) 0.01mol/L磷酸盐缓冲液，pH7.4

1.2 操作步骤

1. 10mg/mL取HRP VmL，溶液为棕黄色，加入0.06mol/L NaIO4 VmL，立刻变为灰绿色。静置30min，4℃

2．加入0.16mol/L乙二醇VmL，溶液变回棕黄色，RT，静置30min。

3．加入抗体Vml 5mg，CB，4℃透析过夜。

4．再加入5mg/mL NaBH4 VmL，加入后溶液有气泡产生。室温静置2h。

5. 50%饱和硫酸铵盐析一次，12000rpm，4℃离心30min。沉淀用5VmL 0.01mol/L PB重悬。装入透析袋。

6. 溶液在0.01mol/L PB，pH7.4中透析过夜。