简介
lodogen 标记法是利用 Iodogen(1,3,4,6-tetra chloro- 3α,6α-diphenyl glycouril)不溶于水的特性,在固相支持物表面介导蛋白质碘化过程,所以中止反应极其简单,只需将蛋白质移出反应管,产物也不需要还原过程,减少了蛋白质暴露于氧化系统,有利于蛋白质活性的保持,更适合大分子量蛋白质,如抗体等的 125I 标记。
原理
lodogen 标记法的基本原理是利用 Iodogen(1,3,4,6-tetra chloro- 3α,6α-diphenyl glycouril)不溶于水的特性,在固相支持物表面介导蛋白质碘化过程。
材料与仪器
步骤
(1)取底部有明显而均匀结晶物的 Iodogen 标记试管。
(2)依次加入 0.25 mol/L pH 7.4 PB 液 20 μl,Na125I 18.5kBq/10 μl 双蒸水,羊抗兔 IgG 抗体 20 μg/20 μl 于干燥物上,混匀。
(3)放置冰上反应 10 分钟,每间隔 2~3 分钟混合一次。
(4)反应终了后加入 300 μl 0.25mol/L pH 7.4 PB 液,将液体全部移至 Sephadex G25 层析柱除去游离 Na125I。
来源:丁香实验