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氯胺 T 标记法标记抗原

相关实验:放射性同位素标记抗原

最新修订时间:

简介

氯胺 T 标记法是利用氧化剂氯胺 T 氧化放射性碘,使其取代蛋白质酪氨酸苯环上的氢,标记后再用还原剂偏重亚硫酸钠终止反应,该方法适用于携带酪氨酸残基的蛋白质。

原理

氯胺 T 标记法的基本原理是用氧化剂氯胺 T 氧化放射性碘,使其取代蛋白质酪氨酸苯环上的氢,标记后再用还原剂偏重亚硫酸钠终止反应,该方法适用于携带酪氨酸残基的蛋白质。

用途

氯胺 T 标记法适用于携带酪氨酸残基的蛋白质。

材料与仪器

试剂:


(1)Na125I:37kBq(1mCi);


(2)0.5mol/L pH7.5 磷酸缓冲液(PB);


(3)ACTH1-39:5 μg;


(4) 氯胺-T:4 mg;


(5) 偏重亚硫酸钠:19.2 mg;


仪器:


Sephadex G25 层析柱、水浴锅、震荡仪等

步骤

(1)ACTH1-39 5 μg,以 0.05 mol/L pH 7.5 PB 液 20 μl 溶解。
(2)0.05 mol / L pH 7.5 PB 液稀释的 Na125I 37 KBq /20 μl 。
(3)将(1)与(2)中的液体混合,添加 0.05 mol/ L pH 7.5 PB 液溶解的氯胺-T(4 mg/mL)20 μl ,立即混匀 30 秒。
(4)加入 0.05 mol/ L pH 7.5 PB 溶解的偏重亚硫酸钠(19.2 mg )20 μl 终止反应。
(5)再加入 200μl 0.05 mol/ L pH 7.5 PB 液,将上述液体移入 Sephadex G25 层析柱,层析除去游离 Na125I。

来源:丁香实验

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