酸性磷酸酶重氮盐后偶联法
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酸性磷酸酶重氮盐后偶联法:
1)孵育液配制
磷酸―6―苯酰-2-萘钠 25rug
蒸馏水 80ml
Wapoll醋酸缓冲液(pH 5.0) 20ml
氯化钠 2g
重氮盐溶液配制:
坚牢蓝B盐 50rug
蒸馏水 50ml
加碳酸氢钠使之碱化。
2)染色程序:
①用新鲜或冷福尔马林固定的组织进行恒冷箱切片:
②切片人孵育液中,室温孵育10―60分钟(新鲜组织切片),或1~2小时(固定后组织切片);
③新鲜组织切片用冷生理盐水洗3次,固定后的组织切片用蒸馏水洗3次;
④放人新鲜配制的冷重氮液中,搅动3~5分钟;
⑤用冷生理盐水或蒸馏水洗3次,每次5分钟;
⑥甘油明胶封固。
3)结果:酶活性部位显示蓝色。
4)对照实验:与铅法相同。