酸性磷酸酶重氮盐后偶联法

互联网2010-12-02

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酸性磷酸酶重氮盐后偶联法：

与碱性磷酸酶相同。重氮化和偶联反应多在碱性溶液中和低温条件下进行。在酸性溶液中容易分解。所以酶作用与偶联反应分两步进行。

1)孵育液配制

磷酸―6―苯酰-2-萘钠 25rug

蒸馏水 80ml

Wapoll醋酸缓冲液(pH 5．0) 20ml

氯化钠 2g

重氮盐溶液配制：

坚牢蓝B盐 50rug

蒸馏水 50ml

加碳酸氢钠使之碱化。

2)染色程序：

①用新鲜或冷福尔马林固定的组织进行恒冷箱切片：

②切片人孵育液中，室温孵育10―60分钟(新鲜组织切片)，或1～2小时(固定后组织切片)；

③新鲜组织切片用冷生理盐水洗3次，固定后的组织切片用蒸馏水洗3次；

④放人新鲜配制的冷重氮液中，搅动3～5分钟；

⑤用冷生理盐水或蒸馏水洗3次，每次5分钟；

⑥甘油明胶封固。

3)结果：酶活性部位显示蓝色。

4)对照实验：与铅法相同。