简介
酸性磷酸酶主要存在于巨噬细胞，定位于溶酶体内。
原理
酸性磷酸酶显示实验的基本原理是在 pH 5.0的环境中，酸性磷酸酶与作用底物甘油磷酸钠（含有磷酸酯）反应，使磷酸酯水解释放出磷酸基，PO3-与铅盐结合形成磷酸铅沉淀。无色的磷酸铅再与硫化铵作用，形成黄棕色到棕黑色的硫化铅沉淀，从而显示酸性磷酸酶在细胞内的存在与分布。
材料与仪器
器材：
恒温箱、冰箱、显微镜、常规实验器械、小白鼠腹腔液涂片。
试剂：
①6％淀粉肉汤
（牛肉膏，0.3 g ；蛋白胨，1.0 g ；氯化钠，0.5 g ；可溶性淀粉，6.0 g ；蒸馏水，100 mL 。煮沸灭菌，4 ℃ 冰箱保存备用。使用时温热水融化。）
②酸性磷酸酶工作液
（硝酸铅，25 mg ；乙酸缓冲液（0.05 mol ／ L ），22.5 mL ；3％β-甘油磷酸钠，2.5 mL 。将硝酸铅加入乙酸缓冲液中，搅拌使之全部溶解，再缓慢地滴人3％β-甘油磷酸钠2.5 mL ，同时快速搅拌，防止产生絮状物而影响实验结果）
③甲醛-钙固定液
（40％福尔马林，10 mL ；10％CaCl2（无水）水溶液，10 mL ；蒸馏水，80 mL 。）
④2％硫化铵溶液
⑤甘油明胶封固剂
步骤
酸性磷酸酶显示实验的基本过程可分为如下几步：
（一）腹腔液涂片
A.取小白鼠1 只 ，每天腹腔注射6％淀粉肉汤1 mL ，连续3 d 。
B.第3天注射后3～4 h ，再腹腔注射生理盐水1 mL ，3 min 后用颈椎脱臼法处死小白鼠，剖开腹腔，用不装针头的注射器吸取腹腔液。
C.将腹腔液滴在预冷的盖玻片上，每片1～2 滴 ，立即放入冰箱（4 ℃ ），让细胞自行铺开。30 min 后取出盖玻片，冷风吹干（室温20 ℃ 以下可自然干燥）。
D.放入盛有酸性磷酸酶工作液的小染缸中，于37 ℃ 处理30 min 。
E.蒸馏水洗片刻，立于吸水纸上吸去多余水分。
F.转入甲醛-钙固定液固定5 min 。
G.蒸馏水洗，方法同（5）。
H.用2％硫化铵处理3～5 min 。
I.蒸馏水洗片刻。
J.在载玻片上滴1 滴 甘油明胶封固剂，将带水的盖玻片有细胞的一面朝下，封固在甘油明胶处。
（二）对照片
A.将腹腔液涂片置50 ℃ 恒温箱中处理30 min ，使酶失活，再进行上述（4）～（10）实验步骤。
注意事项
1.酸性磷酸酶是可溶性酶，以冷固定为佳。经冰冻或甲醛固定后，溶酶体膜通透性明显增加，底物更易进入溶酶体内被酶作用。
2.孵育液应在临用前配制，按顺序依次加入，待硝酸铅完全溶解，再逐次少量加入底物，孵育液也渐变清亮。
来源：丁香实验
