组蛋白乙酰化的研究方法
互联网
19175
组蛋白乙酰化的研究方法
1．HAT活性的测定
HAT可以催化放射性标记的乙酰辅酶 A掺人核心组蛋白(有的选用H4氨基末端的14个氨基酸短肽)底物，然后测定掺人的放射性强度可以确定HAT的活性。HAT的活性单位定义为30~C时，将1pmol醋酸在10rain内掺人小牛胸腺组蛋白所需的酶量。
2．HDAC活性的分析
HDAC活性的检测比较烦琐。
3．染色质免疫沉淀技术(CHIP―PCR)
ChIP可以检测基因组特定区域染色质中组蛋白的乙酰化状态。
(1)用1％的甲醛将核小体与DNA轻微交联。
(2)分离染色质，并用超声仪处理切割到平均3个核小体长度。
(3)用抗乙酰化N―末端组蛋白序列的特异抗体进行免疫沉淀。
(4)逆转交联，抽提免疫沉淀染色质中的DNA。
(5)PCR扩增特定的DNA序列，从而检测特定基因相关染色质中组蛋白乙酰化的程度。
