原代细胞分离和培养基本步骤

互联网2010-11-18

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原代细胞分离和培养基本步骤

1、器官和组织的选择

尽可能的去除不必要的组织和血迹。

2、原代细胞的分离

（1）应用PriCells原代细胞分离试剂盒I、II、III。

（2）根据组织来源不同，可选用不同的PriCells原代细胞分离试剂盒。

3、原代细胞的培养：

（1）PriCells原代细胞特制培养基

（2）PriCells原代细胞特制添加物

（3）优质胎牛血清

4、细胞的培养和鉴定：

PriCells原代细胞鉴定试剂盒

5、原代细胞的传代、保存

（1）传代：依椐细胞的生长状态，生长的细胞1：2或1：3进行传代。

（2）保存：DMSO＋培养液＋血清

按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟）→冰箱冷冻室（30分钟）→超低温冰箱（－80℃ 过夜）→液氮。

6、原代细胞的复苏

（1）取出细胞，迅速放入37℃温水中快速解冻。

（2）吸出细胞悬液，并加10倍以上培养液。

（3）用培养液适当稀释后接种培养瓶，放入37℃ CO2 培养箱静置培养。