原代细胞分离和培养基本步骤
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原代细胞分离和培养基本步骤
1、器官和组织的选择
尽可能的去除不必要的组织和血迹。
2、原代细胞的分离
(1)应用PriCells原代细胞分离试剂盒I、II、III。
(2)根据组织来源不同,可选用不同的PriCells原代细胞分离试剂盒。
3、原代细胞的培养:
(1)PriCells原代细胞特制培养基
(2)PriCells原代细胞特制添加物
(3)优质胎牛血清
4、细胞的培养和鉴定:
PriCells原代细胞鉴定试剂盒
5、原代细胞的传代、保存
(1)传代:依椐细胞的生长状态,生长的细胞1:2或1:3进行传代。
(2)保存:DMSO+培养液+血清
按下列顺序降温:室温→4℃(20分钟)→冰箱冷冻室(30分钟)→超低温冰箱(-80℃ 过夜)→液氮。
6、原代细胞的复苏
(1)取出细胞,迅速放入37℃温水中快速解冻。
(2)吸出细胞悬液,并加10倍以上培养液。
(3)用培养液适当稀释后接种培养瓶,放入37℃ CO2 培养箱静置培养。