单细胞凝胶电泳技术的试验步骤

试剂及材料：

1）PBS
　　2）0.8%正常熔点凝胶（PBS配制）
　　3）0.6%低熔点凝胶（PBS配制）
　　4）毛玻璃片
　　5）盖玻片
　　6）碱性裂解液（2.5mol/L NaCl；100mmol/L Na₂EDTA；10mmol/L Tris；1%肌氨酸钠），临用前加10%DNMSO，1%Triton X-100
　　7）电泳缓冲液（1mmol/L Na₂EDTA；300mmol/L NaOH；Tris.Cl，pH7.5）
　　8）EB（2ug/ml）

步骤：

1.制备第一层胶：100ml 0.8%正常熔点胶，加盖盖玻片，4℃固化10min；

2.制备第二层胶：轻轻地去除盖玻片，在第一层胶上滴加75ul含1×10000个细胞的0.6%低熔点胶（cell与凝胶比例为1：5），加盖盖玻片，4℃固化10min；

4.取出玻片，用PBS缓冲液漂洗3次后置于水平电泳槽内，加入pH13的电泳缓冲液（没过玻片2～3min），放置20min（黑闭）。

3.裂解：去掉盖玻片，将凝胶浸入冰冷的碱性裂解液内（临用前加10% DMAO，1%Triton X-100），4℃裂解1h；

5.电泳：电压20V，300mA，30min

6.取出玻片，用PBS或Tris.Cl，pH7.5漂洗3次，每次3min；

7.染色：胶上滴加3ulEB，加盖盖玻片，24h检测。或者4℃，潮湿，闭光的条件下保有胶片，观察时再染色，镜检。