细胞生物基本方法:冻存
互联网
835
冻存方法
1. 细胞:选对数生长期细胞,收集细胞 24 小时前换液一次。
2. 计数:按常规方法把细胞制成细胞悬液,计数,令细胞密度达 5 × 106 /ml ,离心去上清,吸入离心管中。
3. 冻存液:先用培养液 9 分+ DMSO 1 分(或甘油)配成 10 %的 DMSO 冻存液,按上法一滴滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。
4. 分装:分装入无菌安剖中,每安剖加 1.5 毫升细胞悬液。
5. 封口:用塑料安剖时拧紧瓶口即可;如用火焰封闭安剖口后,仔细检查,定要封严,必要时可浸入蓝色液中观察,为安全起见,把安剖缝入纱布小袋中,以防液氮浸入后,融解时因受热发生爆炸伤人;纱袋一端系以线绳,末端扎有小牌,注明:细胞名称,冻存日期,以便日后查找