HLA基因分型方法：PCR－SSCP法

PCR － SSCP 法

 

1 ）提取 DNA

 

同前 RFLP 法

 

 

2 ） PCR 扩增

 

同前 PCR-RFLP ，也可加入 1 μ Ci³² P-dCTP 标记产物。

 

 

3 ）非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

 

1． 取 PCR 的扩增产物，加凝胶加样液 3 μ l ， 95 ℃加热变性 2min ，冰浴骤冷。同位素掺入的 DNA 取 1 μ l 稀释 10 倍，加样 3 μ l 。

2． 取样品用微量加样器加入非变性聚丙烯酰胺凝胶样品孔中， 200V 电泳过夜。

 

 

4 ）放射自显影

 

1． 未掺入同位素的 PCR 产物电泳后，取出凝胶床，撬去粘附的玻璃板，将凝胶浸在固定液中 15min 。

2． 用 0.2 ％ AgNO₃ 浸泡 10min ，用去离子水冲洗。

3． 在显色液中显影，直到获得满意效果。将显色好的凝胶转贴到滤纸上，照相分析结果。