干货 | NTA 检测保姆式图解

首先，我们先看原理：

纳米颗粒示踪分析仪(NTA)利用光散射和布朗运动的属性，以获得液体悬浮液中样品的粒径分布。

颗粒的运动速度和其粒径有着直接的关联；此技术观测的是颗粒的散射光斑，而不是颗粒本身； 「眼见为实」,确保分析的是目标颗粒而不是背景颗粒或噪音。

然后，我们看下设备介绍：（声明：本次操作基于最近正在使用的 NS300。）

然后，我们看下具体是如何操作的：

开机→清洗→上样→设置参数→调整视野→设置保存路径→检测 →仪器自动分析结果→出报告→保存后下样关机

说明：散射光模式与荧光检测模式的步骤差别只有设置的参数不同，其余步骤一致，输出的报告格式也一致；

1、 开机；

2、打开电脑显示屏上的软件系统；

3、注射器吸稀释液打入管路，清洗残留，再打入空气去除稀释液。用稀释液清洗盖板与激光器接触面，用无尘纸擦干；

4、安装盖板，螺丝固定（对角线）；

5、用注射器（查看是否有气泡）将试剂样注入样品池，椭圆形镜片观察到液面全覆盖即可；

6、激光器推入仪器，滑轨到底，绿灯亮时转上红色开关（位置正确时，开关转的很轻松）；

7、设置参数，Screen Gain（屏幕增益）和 Camera level（相机级别），一般 4 和 11；再调节仪器上的焦距；

8、设置 SOP（Standard  Measurement）：勾选 Dilution 稀释倍数并填写；

9、Base filenames 填写路径（路径中不能有中文）；

10、点击 Create Script（创建脚本）；

11、左边拖出来 Script panel，修改 REPEAT（重复次数）后面的数字；点击 RUN，在弹出界面输入文件信息，点 OK；

12、检测完成后，调整 Detection Threshold（一般 5），使得想要的颗粒都标上红色+，点击 Setting OK，开始处理；

13、处理完毕会自动跳至 Export Settings，点击 Export 输出报告；

14、检测完单个样品后，注射器吸出样品，拆开样品池，用新注射器装入稀释液冲洗样品流过的管道，打入空气去除残留，再用稀释液清洗盖板与激光器接触面，用无尘纸擦干，重复 4-12 步骤，检测下一个样品；

15、所有样品检测完毕后，拆开装置，清洗后，将装置归位到开机前状态（盖板和螺丝分开装入袋中，无尘纸遮盖上激光器镜面，将他们全部放入仪器内部，再关上仪器）；

16、拷贝完数据后，刷卡下机，记录仪器使用时长，关闭 NTA 仪器侧面开关。电脑关掉显示屏即可。

 

最后，我们看看常见问题有哪些？

1、荧光检测只检测荧光颗粒，要得到荧光效率需将荧光样本检测 2 次，分别是散射光检测和荧光检测，得到总颗粒数和荧光颗粒数。单测荧光颗粒数意义不大；

2、NS300 没有扣除本底的功能，如有需要，可以检测稀释液浓度后以后自己减去；

3、送样样品要求：样品需要保证原液（或稀释至）600ul 时，粒子数在 1E+8 以上，需要精确结果的需在 1E+9 以上；

4、当样品浓度不在检测范围内时，浓度下方会出现以下提示：

Concentration measurements may require some caution due to noiseSee summary file for more info

Concentration measurements unreliable due to high particle count See summary file for more info

Concentration measurements may be unreliableSee summary file for more info

文章来自：宇玫博生物