材料与仪器
NTA-SAM 芯片 配体蛋白靶蛋白(组氨酸标记)
PBS/HeBS NaOH Ni(II)SO4
BIAcore SPR 设备 BIA 评估软件(point-and-click)
PBS/HeBS NaOH Ni(II)SO4
BIAcore SPR 设备 BIA 评估软件(point-and-click)
步骤
1. 插入一张 NTA-SAM 芯片并使用 PBS 或者 HeBS 作为运转缓冲液。
2. 注入 10 μl 1 mmol/L 的氢氧化钠,然后注入 25 μl 水性的 1% Ni(II)SO4,随后再加入组氨酸标记的配体蛋白和 aI 预测靶蛋白。
3. 使用至少三种靶蛋白的不同浓度重复步骤 2 中的操作。
组氨酸标记的配体蛋白能够在 200 mml /L 咪唑的处理下脱离表面。另外,每个实验可用一个新鲜的流动室(每张芯片有 4 个流动室)。
4. 使用 BIA 评估软件 point-and-click,计算分离率和结合率常数。使用三个 IE 蛋白浓度所得的结合率和分离率的平均值计算平衡常数。
来源:丁香实验