流式课堂 | 外周血抗凝剂，选 EDTA or 肝素？

外周血是我们流式实验中常用到的样本之一。由于血液离体后会在凝血因子的作用下凝固（图1），采集外周血样本时，需要使用带抗凝剂的采血管，或采集后立即加入抗凝剂。通常，我们流式实验中用到的抗凝剂有两种：EDTA 和肝素。

图1：凝血（左）与抗凝（右）效果展示

1 两种抗凝剂的抗凝原理

EDTA（乙二胺四乙酸）：

EDTA 能与血液中的 Ca^2＋ 螯合，使 Ca^2＋ 失去凝血作用，阻止血液凝固。常用的是钠盐或钾盐。

肝素：

加强抗凝血酶（AT）灭活丝氨酸蛋白酶的作用，阻止凝血酶的形成和血小板的聚集，从而阻止血液凝固。

2 两种抗凝剂的特点

EDTA

钾盐在血液中的溶解性更好，因而使用较多，尤其是二钾盐——EDTA-K₂ 可以通过喷雾干燥法附着在采血管的内表面，不会对采集的血液样品产生稀释。

EDTA 对血细胞形态的影响比较小，有较好的稳定性，但 EDTA 会抑制或干扰纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体的聚合，不适于血凝和血小板功能的检测，也不适用于钙、钾、钠及含氮物质的测定。

肝素

肝素螯合力低，对水分子运动的影响小，对血液成分的干扰少，不影响红细胞体积，不引起溶血，可谓优点众多。但肝素也有两个明显缺点：

● 肝素主要从猪牛羊等动物组织中分离得到，相比其他抗凝剂的成本更高；

● 肝素只能延缓凝血过程而不能阻止凝血。实际使用中发现，使用肝素钠作为抗凝剂的全血，在常温 10~12 小时，会逐渐出现凝血结块的现象。

3 EDTA or 肝素？

由于两种抗凝剂会对血液产生不同的干扰，我们通常会根据实验目的来选择合适的抗凝剂。

a 若样本直接裂解红细胞，进行表面指标染色实验，则两种抗凝剂都可使用；

b 因为肝素会对血小板产生影响，所有血小板相关实验不建议使用肝素；

c 如果是采血后检测细胞因子，则不建议使用EDTA抗凝。

从图中结果可以看出，使用两种抗凝剂抗凝后，检测细胞因子，EDTA 抗凝样本的 IFN-γ 表达量明显低于肝素抗凝样本。

由于 EDTA 能与 Ca^2＋ 螯合，导致细胞因子刺激剂——离子霉素（Ionomycin）转运的 Ca^2＋ 减少，而 Ca^2＋ 又是细胞因子分泌必不可少的物质，因此，进行细胞因子检测，建议使用肝素抗凝。