怎样利用亲和层析法分选细胞？

免疫亲和层析法常用于蛋白质等生物大分子的纯化。但你是否想过，一根亲和层析柱子也能用来进行细胞分选，而且还不使用高亲和力抗体？

在细胞分选中，我们常常利用免疫识别特性来进行，比如流式分选(FACS)和免疫磁分选(MACS)。

免疫细胞的划分是依据表面标志 CD 分子，可以被抗体识别。比如针对 CD4 + T 细胞这一特定类群，表面含有 CD45、CD3 和 CD4 标记。而表达 CD4 就是辅助性 T 细胞的特征。

由此而来，免疫磁分选利用特定抗体偶联磁珠来捕获细胞。细胞与磁珠结合后，再利用磁分离器来分选。但具体选用何种方法，还是要看下游的研究。如果，想在选出的 CD4 + T 细胞上做基因功能研究，就不能采用会影响靶细胞基因表达或者会刺激细胞的方法，还得获得大量高纯度、高活力的细胞。

而高亲和力抗体的使用，则不免对细胞产生刺激。

如果为了避免刺激细胞，不使用高亲和力抗体，细胞分选该如何进行呢？

无踪免疫亲和层析(TACS)细胞分选

对于这个问题，来自德国 IBA Lifesciences 的团队考虑到了亲和层析法。

进行蛋白纯化最常用的方法之一，是亲和层析法，借助标签和配体的亲和力进行蛋白纯化。纯化的重组蛋白通常能以特异性的方式被洗脱，例如，在 Strep 标签蛋白纯化中，加入生物素(biotin)即可断开 Strep 标签与配体 Strep - Tactin 的作用，达到有效洗脱的目的。得到高纯度有活性的蛋白质应用在多种下游实验中，如研究蛋白质间相互作用等。

那么是否可以以此为基础，将标签配体亲和力加以利用，结合免疫识别特性，用温和的方法得到高纯度的目的细胞呢？

如果避免使用高亲和力抗体，可以考虑选取抗体上的 Fab 片段。将 Fab 与亲和 Strep 标签融合后，得到的表位标签Fab - Streps，留有抗体-抗原相互作用，还具备标签-配体相互作用。

Fab - Streps 的 Fab 段既对目的细胞的特异性 CD 标记有着亲和力，能抓取目的细胞；Strep 段又能结合亲和层析中，固定在多种介质上的配体 Strep - Tactin，如重力柱，磁珠，荧光等，一举两得。

这样一个能应用于细胞分选的无踪免疫亲和层析方法称为 Fab - TACS(Fab - based traceless affinity cell selection)。

亲和层析法的分选细胞的步骤是怎样进行的呢？其实和蛋白纯化并无明显区别。