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做细胞冻存的人都经历过这些致命败笔!你逃过了吗?

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在园子里经常看到询问冻存、复苏细胞的方法和注意事项。故介绍一些致命的 “败笔”,和解决方法。 希望对大家有帮助。

( 以 Raji 为例)

一、细胞冻存:

1. 错误的时机:

细胞状态不好(长的太过了,培养液已经很黄;细胞可疑污染;细胞已 经开始凋亡或崩解;连续培养超过二个月,细胞性状已有改变改变)。

解决:

最佳时机:细胞增殖旺盛,情况稳定,试验效果良好,复苏后两周内。

2. 细胞太少:

冻存时细胞浓度低于 1-5×1000,000/ml。(复苏很难成功)。

解决:

离心后调整细胞浓度。(不要重新洗细胞)。

3. 盖子不紧:

冻存管的盖子一定要拧紧,否则复苏水浴时会渗水,造成污染。

解决:

选择原配的管子和盖子(不同牌子 / 型号的颜色会有差别)。

4. 单薄的冻存盒:

放在-80 度的冻存盒,壁太薄,细胞在被迅速降温。

解决:

选择厚壁泡沫塑料盒,或塞入大量干棉花。(冻存的原则:缓降!)

5. -80 度太久:

放在-80 度冰箱的时间超过半年。(冰箱的温度难以恒定:开门 / 关门,电压不稳等)

解决:

尽快转入液氮。

6. 液氮不足:

液面不能漫过所有细胞。

解决:

定期测量液氮储备,保证细胞全部浸在液面下。

7. 取错细胞:

找不到 / 拿错冻存管。

解决:

每支冻存管都标上细胞的名称,冻存时间,并记录在册。

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