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DNA导入哺乳动物细胞常见的方法

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名称

 

机制

 

转染效率

 

用途

 

优缺点

 

影响因素

 

磷酸钙转染法

 

内吞作用

 

20%细胞被转染

 

瞬时表达

 

1、简单有效

 

2、适用于贴壁、非贴壁细胞

 

  3、常作首选方法

 

 

1、Ca2 ,DNA浓度

 

2、PH值,沉淀反应时间

 

  3、氯喹,甘油和丁酸钠处理

 

 

DEAE葡聚糖转染法

 

抑制核酸酶

 

内吞作用

 

BDC-1,CV-1和COS细胞中较高

 

 

瞬时表达

 

操作简单

 

1、需高浓度DNa

 

2、DEAE葡聚糖浓度

 

  3、温育时间

 

 

Poly-brene转染法

 

不清楚

 

低分子量DNA转染率高于磷酸钙法

 

 

CHO细胞的稳定转化子

 

能得到较多的稳定转化子

 

1、受体细胞类型

 

2、转染调控信号

 

  3、DNA浓度

 

 

原生质体融合

 

胞膜融合

 

50-100%转染,稳定子得率为0.2-0.02%

 

瞬时表达

 

稳定表达

 

1、操作复杂

 

2、不能进行共转染

 

  3、慎用于筛选营养缺陷型变异株

 

 

1、溶菌酶、PEG浓度

 

2、温育时间

 

电穿孔

 

高压在膜上形成微孔

 

效率较高

 

瞬时表达

 

稳定转化

 

1、需精密仪器

 

2、可用于动物、植物细胞和细菌

 

1、电场强度

 

2、脉冲长度

 

  3、温度,DNA浓度

 

 

  4、培养液

 

 

脂质体

 

脂膜融合

 

50-60%转染

 

瞬时表达

 

稳定转化

 

1、操作简单

 

2、可用于体内试验

 

1、脂质体质量

 

2、DNA浓度

 

胞核微注射法

 

直接注射

 

50-100%转染

 

稳定转化

 

1、需要特殊仪器

 

2、处理样品数量少

 

  3、高效

 

 

1、注射技术

 

2、DNA浓度

 

 

 

 

 

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