DNA导入哺乳动物细胞常见的方法
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名称
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机制
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转染效率
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用途
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优缺点
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影响因素
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磷酸钙转染法
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内吞作用
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20%细胞被转染
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瞬时表达
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1、简单有效
2、适用于贴壁、非贴壁细胞
3、常作首选方法
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1、Ca2 ,DNA浓度
2、PH值,沉淀反应时间
3、氯喹,甘油和丁酸钠处理
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DEAE葡聚糖转染法
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抑制核酸酶
内吞作用
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在BDC-1,CV-1和COS细胞中较高
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瞬时表达
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操作简单
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1、需高浓度DNa
2、DEAE葡聚糖浓度
3、温育时间
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Poly-brene转染法
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不清楚
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低分子量DNA转染率高于磷酸钙法
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CHO细胞的稳定转化子
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能得到较多的稳定转化子
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1、受体细胞类型
2、转染调控信号
3、DNA浓度
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原生质体融合
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胞膜融合
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50-100%转染,稳定子得率为0.2-0.02%
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瞬时表达
稳定表达
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1、操作复杂
2、不能进行共转染
3、慎用于筛选营养缺陷型变异株
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1、溶菌酶、PEG浓度
2、温育时间
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电穿孔
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高压在膜上形成微孔
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效率较高
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瞬时表达
稳定转化
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1、需精密仪器
2、可用于动物、植物细胞和细菌
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1、电场强度
2、脉冲长度
3、温度,DNA浓度
4、培养液
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脂质体
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脂膜融合
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50-60%转染
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瞬时表达
稳定转化
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1、操作简单
2、可用于体内试验
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1、脂质体质量
2、DNA浓度
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胞核微注射法
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直接注射
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50-100%转染
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稳定转化
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1、需要特殊仪器
2、处理样品数量少
3、高效
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1、注射技术
2、DNA浓度
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