免疫中和反应技术(Neutralization test technique):固定血清稀释病毒法
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病毒或毒素与相应的抗体结合后,失去对易感动物的致病力,谓之中和试验。本试验主要用于: ① 从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病; ② 用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型; ③ 测定抗病毒血清或抗毒素效价; ④ 新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行,亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑减少法等。
本法多将病毒作 <font>10</font> 倍递增稀释,分置 <font>2</font> 列试管,第一列加正常血清(对照组),第二列加待检血清(试验组)。混合后,置 <chmetcnv><span><font>37</font> </span> <span>℃</span> </chmetcnv> 作用 <font>1h</font> ,将各管混合液分别接种选定的试验动物,每一稀释度用 <font>3</font> ~ <font>5</font> 只动物。接种后,逐日观察,并记录其死亡数,观察结束后,计算 <font>LD<sub>50</sub> </font> 和中和指数,本法适用于大量检样的检测。
表 固定血清稀释病毒法术式
混合前
病毒稀释
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<font>2</font> × <font>10<sup>-1</sup> </font>
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<font>2</font> × <font>10<sup>-2</sup> </font>
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<font>2</font> × <font>10<sup>-3</sup> </font>
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<font>2</font> × <font>10<sup>-4</sup> </font>
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<font>2</font> × <font>10<sup>-5</sup> </font>
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<font>2</font> × <font>10<sup>-6</sup> </font>
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<font>2</font> × <font>10<sup>-7</sup> </font>
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-
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正常
血清
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稀释病毒
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-
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-
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-
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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-
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正常血清
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-
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-
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-
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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对照组
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稀释液
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-
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-
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-
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-
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-
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-
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-
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<font>1.0</font>
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待检血清
|
稀释病毒
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<font>1.0</font>
|
<font>1.0</font>
|
<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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-
|
待检血清
|
<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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<font>1.0</font>
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中和组
|
稀释液
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-
|
-
|
-
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-
|
-
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-
|
-
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<font>1.0</font>
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混合后病
毒稀释
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<font>10<sup>-1</sup> </font>
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<font>10<sup>-2</sup> </font>
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<font>10<sup>-3</sup> </font>
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<font>10<sup>-4</sup> </font>
|
<font>10<sup>-5</sup> </font>
|
<font>10<sup>-6</sup> </font>
|
<font>10<sup>-7</sup> </font>
|
-
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表 固定血清稀释病毒法中和试验(例)
病毒稀释 |
<font>10<sup>-1</sup> </font>
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<font>10<sup>-2</sup> </font>
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<font>10<sup>-3</sup> </font>
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<font>10<sup>-4</sup> </font>
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<font>10<sup>-5</sup> </font>
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<font>10<sup>-6</sup> </font>
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<font>10<sup>-7</sup> </font>
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<font>LD<sub>50</sub> </font> [ <font>2</font> ]
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中和指数 |
正常血清对照组 |
- |
- |
- |
<font>4</font> / <font>4</font> [ <font>1</font> ] |
<font>3</font> / <font>4</font> |
<font>1</font> / <font>4</font> |
<font>0</font> / <font>4</font> |
<font>10<sup>-5.5</sup> </font>
|
<font>10<sup>3.3</sup> </font> = <font>1.995</font> |
待检血清中和组 |
<font>4</font> / <font>4</font> |
<font>2</font> / <font>4</font> |
<font>1</font> / <font>4</font> |
<font>0</font> / <font>4</font> |
<font>0</font> / <font>4</font> |
<font>0</font> / <font>4</font> |
<font>0</font> / <font>4</font> |
<font>10<sup>-2.2</sup> </font> |
注:[ <font>1</font> ]分母为接种数,分子为死亡数;
[ <font>2</font> ] <font>LD<sub>50</sub> </font> 计算见实例。
中和指数=中和组 <font>LD<sub>50</sub> /</font> 对照组 <font>LD<sub>50</sub> =10<sup>-2.2</sup> /10<sup>-5.5</sup> =10<sup>3.3</sup> </font>
查 <font>3.3</font> 反对数是 <font>1.995</font> ,故中和指数 <font>10<sup>3.3</sup> </font> = <font>1.995</font> 。也就是说该待检血清中和病毒的能力为正常血清的 <font>1.995</font> 倍。本法多用以检出待检血清中的中和抗体,对病毒而言,通常中和指数大于 <font>50</font> 者判为阳性, <font>10</font> ~ <font>49</font> 为可疑,小于 <font>10</font> 为阴性。