免疫中和反应技术(Neutralization test technique)：固定血清稀释病毒法
互联网
病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力，谓之中和试验。本试验主要用于： ① 从待检血清中检出抗体，或从病料中检出病毒，从而诊断病毒性传染病； ② 用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型； ③ 测定抗病毒血清或抗毒素效价； ④ 新分离病毒的鉴定和分型，中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行，亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑减少法等。
本法多将病毒作 10 倍递增稀释，分置 2 列试管，第一列加正常血清（对照组），第二列加待检血清（试验组）。混合后，置 37 ℃ 作用 1h ，将各管混合液分别接种选定的试验动物，每一稀释度用 3 ～ 5 只动物。接种后，逐日观察，并记录其死亡数，观察结束后，计算 LD50 和中和指数，本法适用于大量检样的检测。
表 固定血清稀释病毒法术式
|
混合前
病毒稀释
|
2 × 10-1
|
2 × 10-2
|
2 × 10-3
|
2 × 10-4
|
2 × 10-5
|
2 × 10-6
|
2 × 10-7
|
-
|
|
|
正常
血清
|
稀释病毒
|
-
|
-
|
-
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
-
|
|
正常血清
|
-
|
-
|
-
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
|
|
对照组
|
稀释液
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
1.0
|
|
待检血清
|
稀释病毒
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
-
|
|
待检血清
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
|
|
中和组
|
稀释液
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
1.0
|
|
混合后病
毒稀释
|
10-1
|
10-2
|
10-3
|
10-4
|
10-5
|
10-6
|
10-7
|
-
|
表 固定血清稀释病毒法中和试验（例）
|
病毒稀释 |
10-1
|
10-2
|
10-3
|
10-4
|
10-5
|
10-6
|
10-7
|
LD50 ［ 2 ］
|
中和指数 |
|
正常血清对照组 |
- |
- |
- |
4 ／ 4 ［ 1 ］ |
3 ／ 4 |
1 ／ 4 |
0 ／ 4 |
10-5.5
|
103.3 ＝ 1.995 |
|
待检血清中和组 |
4 ／ 4 |
2 ／ 4 |
1 ／ 4 |
0 ／ 4 |
0 ／ 4 |
0 ／ 4 |
0 ／ 4 |
10-2.2 |
注：［ 1 ］分母为接种数，分子为死亡数；
［ 2 ］ LD50 计算见实例。
中和指数＝中和组 LD50 / 对照组 LD50 =10-2.2 /10-5.5 =103.3
查 3.3 反对数是 1.995 ，故中和指数 103.3 ＝ 1.995 。也就是说该待检血清中和病毒的能力为正常血清的 1.995 倍。本法多用以检出待检血清中的中和抗体，对病毒而言，通常中和指数大于 50 者判为阳性， 10 ～ 49 为可疑，小于 10 为阴性。
